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重大人畜共通传染病之防检疫    高密度的畜养模式、贸易自由化及国际旅游频繁等趋势，已造成 防疫与检疫工作难度之提升。目前许多重大人畜共通传染病在国际间 蔓延，其中高病原性家禽流行性感冒除肆虐于亚洲外，中东、欧洲及 非洲亦相继沦陷，其预防与治疗方法均尚未完备；狂犬病在我国邻近 之中国发生，且造成每年上千人的死亡，而狂牛病则在许多国家引起 社会不安，显示其对世界各国冲击不可轻忽。鉴于以往对人畜共通动 物传染病的防治常忽略其对社会经济面的冲击，本计划除选定重要人 畜共通传染病办理风险评估、防疫检疫技术与设备之研发及应用外， 并着重其社会经济分析、国际防疫检疫合作交流及相关信息之传播推 广。    1. 家禽流行性感冒基因重组杆状病毒疫苗之开发  家禽流行性感冒（avian influenza, AI ），简称为禽流感，是一种禽 类重要之传染病，此病毒共有 16 种血球凝集素（hemagglutinin,HA） 及 9 种神经胺酸（neuraminidase,NA），其中高病原性 H5 及 H7 血清 型，对鸡或火鸡造成高度传染及急速死亡，因此对于   1‐脱氧氮杂‐D‐ 葡萄糖抑制 B16F10 黑色素癌细胞之侵袭（A ），移行（B）及黏附（C ） 之效果世界家禽产业造成极大经济威胁，故研制价廉、易大量生产之 家禽流行性感冒疫苗为当前相当重要之防疫工作要务。因 HA 是主要 引起免疫反应之免疫原，故期建构出将带有水泡性口炎病毒 G 蛋白质 （VSV‐G ）并含 HA 基因之伪型病毒，以利用杆状病毒作为基因载体， 将 HA 基因送入鸡只细胞令其表现，进而在体内引发细胞性免疫及体 液性免疫之产生。前期研究计划已成功利用泛用型杆状病毒呈现平 台，将 H5N2 HA 呈现在重组杆状病毒之封套及细胞膜上，以研制家 禽流行性感冒 HA 次单位疫苗。  研究系以新型杆状病毒表现系统将 HA 选殖至研发之 pBacSC 载体 上，将 H5N2 AIV HA 基因选殖于含有杆状病毒跨膜区域 gp64 TM 基因 和细胞质区域 gp64 CTD 基因的平台，再将重组的质体 DNA 转形至 DH10Bac E.coli，并筛选出重组的 BacmidDNA 转染于昆虫细胞（SF9 ）， 使 HA 蛋白表现在杆状病毒的封套上，形成所谓重组杆状病毒。以西 方墨点法（western blot assay ）分析证实 HA 蛋白具有抗原性。经由 共轭焦显微镜（confocal microscopy）观察， 证实基因重组杆状病毒 在感染昆虫细胞后，可以有效地表现重组 HA 蛋白于细胞膜上；  由 免疫金电子显微镜观察（immunogold electron microscopy），也进一步 证实重组 HA 蛋白也呈现在杆状病毒的封套上。    本研究已成功开发两个家禽流行性感冒之基因重组杆状病毒 （Bac‐HA）。以 Bac‐HA 抗原和 ISA70 油质佐剂制备成疫苗后，鸡只免 疫 2 次可以引起良好的免疫反应（HI 抗体力价  32 倍）及可耐过 H5N1 强毒之攻击。鸡只具血球凝集抑制（hemagglutiniation inhibition, HI） 抗体力价 32 倍即可耐过 H5N1 强毒之攻击。鸡只免疫 2 次后可维持 至少 17 周之 32 倍 HI 抗体力价，以保护 H5N1 强毒之攻击。为进一 步提高杆状病毒能有效转导于哺乳类动物细胞，于表现载体加入 VSV‐G 以及巨大细胞病毒（cytomegalovirus, CMV ）启动子，研究证实 具有VSV‐G 以及cytomegalovirus 启动子之杆状病毒载体可使杆状病毒 能有效转导于哺乳类动物细胞。  为了提升重组 HA 蛋白呈现于细胞膜之效率，  已成功研究开发一 个具有四个 promoter 之新颖杆状病毒载体 BacVE‐CMVHA3，可同时表 现多个不同外源性蛋白或同时表现多个 HA 蛋白。以西方墨点法侦测 HA 蛋白之表现证实此新型表现载体可大幅提升蛋白之表现，因此提 高重组杆状病毒次单位疫苗之效益，及大幅降低疫苗制备之成本。      2. 家禽流行性感冒疫苗 DNA 佐剂／细胞激素佐剂之研发  有关家禽疫苗产业的佐剂，先前已研发技术：（1）主要使用的佐 剂为铝胶佐剂及油质佐剂，缺点为无法提升特异性 Th1 细胞对不活化 疫苗及活毒减毒疫苗的免疫反应，无法产生足够保护力之体液性及细 胞性的免疫反应；（2 ）目前在禽类用疫苗所加入的CpG DNA 佐剂， 结构全部为化学合成的核酸序列，可增加禽类