木聚糖酶产生菌XY1432液体发酵的响应面法优化.pdf

学兔兔 第37卷 第11期 化 工 技 术 与 开 发 Vo1．37 No．11 2008年11月 Technology Development of Chemical Industry Nov．2008 木聚糖酶产生菌XY1432液体发酵的响应面法优化 崔月明 ，樊妙姬 ，韦莉莉 ，栾桂龙 ，童小国 (1．广西大学动物科学技术学院，广西南宁 530004；2．广西大学生命科学与技术学院，广西南宁 530004； 3．珠海金钱饲料有限公司，广西南宁 530004) 摘 要：用响应面法对短小芽孢杆菌XY1432液体发酵生产木聚糖酶的培养条件进行了优化，首先用单因素 试验，选出最佳的碳源为玉米芯+麸皮，氮源为碳酸铵，pH为8；然后用Plackett、Burman法对12个相关影响因素进 行了评价，选出3个主要的影响因素碳源，硫酸镁和磷酸二氢钾做最陡爬坡试验，逼近最大产酶区域；最后用响应 面法分析确定了主要影响因素的最佳条件，使酶活性由638IU提高到1882IU。 关键词：木聚糖酶；短小芽孢杆菌；Plackett—Burman法；响应面法；优化 中图分类号：Q 814 文献标识码：A 文章编号：1671—9905(2008)11—0013—04 利用微生物发酵生产木聚糖酶，影响木聚糖酶 minI1离心5 min，上清液即为粗酶液。 产量的因素除了菌种本身以外，还与培养基组成，培 酶活力测定：取底物1 mL于管中，据酶活大小 养条件等有关。这将涉及到多个可变因子，那么在 加适量稀释的粗酶液，补加柠檬酸缓冲液(pH：6) 多个因子起作用的生化过程中，如何快速有效地找 至2 mL，60℃水浴反应 10 min，加3 mL DNS混 出主效应，确定出最佳培养基组成和培养条件是很 匀，煮沸10 min，取出冷却后加水至25 mL，在540 关键的工作。近年来，响应面法已广泛应用于微生 nm处测OD．值。以每min产生1 木糖的酶量 物发酵条件的优化中[ ，它可以利用一些统计软件 作为一个酶活单位。 很方便地得到满意的结果。本试验用Plackett．Bur． 1．5 试验设计 man法和响应面法优化培养基及培养条件，以期提 1．5．1 Plackett—Burman设计 高短小芽孢杆菌1432产木聚糖酶的酶活。 Plackett和Burman(1946)提出的这个设计是在 N次试验中研究N一1(N是4的倍数)个变量的二 l 材料与方法 水平分式析因设计；它基于非完全平衡块原理，能用 1．1 菌种XY1432 最少试验次数估计出因素的主效应，适用于从众多 本试验室从广西大学农场稻N_-k壤中筛选 ]。 的考察因素中快速有效地筛选出最为重要的几个因 1．2 培养基及培养条件 素，并可根据数据拟合的一次多项式有效地确定最 种子培养基(g·L-1)：(NH4)2SO4 0．5，K2 O4 陡爬坡方向，由此接近最大响应区域 6。在本试验 1．0，MgSO40．3，( 2 0．2，K2SO40．1，NaC1 0．2，自 中，选出可能影响木聚糖酶发酵的12个因素，对这 制玉米芯半纤维素[引15，pH=7。 12个因素选用N=16的PB设计，并余留3个空项 产酶培养基(g·L )：将种子培养基中的半纤 做误差分析，SAS设计