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　　祛疣洗剂提取纯化工艺研究 作者：鞠建明 钱大玮 朱玲英 沈红 李英 【摘要】 ：目的研究祛疣洗剂制备工艺，优选最佳提取、纯化工艺条件。方法以羟基红花黄色素A含量、含固量为检测指标，用正交实验考察了3种因素（加水量、煎煮时间、煎煮次数）对其水煎煮工艺的影响；然后比较了不同的醇沉浓度的去杂效果。结果祛疣洗剂最佳水提工艺条件为加12倍量水，煎煮2次，1 h/次；去杂工艺以60%醇沉为佳。结论制备工艺合理。 【关键词】 祛疣洗剂 高效液相色谱 正交实验 醇沉 羟基红花 　　黄色素A祛疣洗剂是江苏省中医药研究院临床经验方，疗效确切。该方由狼毒、红花、板蓝根等6味药组成，具有清热解毒，杀虫除湿之功，用于 治疗 各种赘疣。红花为本方中主要药味，主要活性成分为羟基红花黄色素A。为了确保该制剂制备工艺的合理性，我们以羟基红花黄色素A为主要考察指标，对处方的水煎煮工艺和纯化工艺进行了优选，确定了合理的制备工艺。 1 仪器与试药 1.1 仪器 pol。 2.1.3 含量测定 含固量测定：精密量取样品液25 ml，水浴蒸干，105℃烘3 h，取出置干燥器内冷却30 min，迅速称重。结果见表2。 羟基红花黄色素A的含量测定：①色谱条件［2，3］：色谱柱为Alltima C18（4.6 mm×250 mm ，5 μm）；流动相为甲醇-乙腈-0.5%磷酸水（26∶2∶72）；流速1.0 ml·min-1；检测波长400 nm；柱温35℃。在此条件下羟基红花黄色素A与相邻峰达到基线分离（见图1）。②对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A对照品1.866 mg置于10 ml量瓶中，用25%甲醇溶解并定容至刻度，即得每毫升含0.186 6 mg的对照品溶液。③供试品溶液的制备：取正交实验样品液适量，离心，上清液过0.45 μm的微孔滤膜，即得供试品溶液。④标准曲线的制备：精密吸取羟基红花黄色素A对照品溶液1，5，10，15，20，25 μl，注入液相色谱仪，测定其峰面积，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程：Y=2.55×106X-2.20×105，r=0.999 8。⑤精密度实验：精密吸取对照品溶液10 μl，连续进样6次，峰面积的RSD为0.4%。⑥供试品溶液的含量测定：精密吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，依法测定， 计算 含量。结果见表2。 2.1.4 方差分析结果 将1～9号实验综合评分进行方差分析，结果见表3。表3 方差分析结果 2.1.5 正交实验优选结果 由直观分析可知，极差(R)最大的为C因素,其次分别为B因素、A因素。说明对羟基红花黄色素A及浸出物含量影响最大的为煎煮次数，其次分别为煎煮时间、加水量，最佳组合为A3B2C2；从方差分析结果可知：A，B，C 3因素均无统计学意义（Pgt;0.05），选任何水平都可以，所以以极差分析结果A3B2C2作为最佳提取工艺，即加12倍量水，煎煮2次，煎煮1 h/次。 2.1.6 验证实验 按优选的最佳提取工艺进行实验，测定样品中羟基红花黄色素A的含量及浸出物含量。结果见表4。表4 工艺验证实验结果 由表4可见，确定的提取工艺优于正交实验中的任何一组，且重复性较好，说明确定的工艺合理。 2.2 纯化工艺中醇沉浓度的优选 2.2.1 样品液的制备 按处方比例称取药材725 g，依照最优提取工艺进行煎煮，减压浓缩（lt;65℃）至相对密度为1.10（60℃）的清膏，备用。 取清膏3份，每份100 ml，分别加乙醇111，171，280 ml，使乙醇浓度达50%，60%，70%，室温下静置48 h，抽滤，将滤液用相应浓度乙醇定容至400 ml，备用。 2.2.2 含量测定 含固量测定：精密量取醇沉前药液10 ml及醇沉液50 ml，水浴蒸干，105℃烘3 h，取出置干燥器内冷却30 min，迅速称重， 计算 即得。 羟基红花黄色素A含量测定：精密量取醇沉前药液2 ml置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，得清膏供试品溶液；精密量取3种不同醇沉液2.5 ml,置10 ml量瓶中，加相应浓度的乙醇稀释至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，得醇沉供试品溶液。精密吸取各供试品溶液20 μl，注入高效液相色谱仪，依法测定。结果见表5。表5 醇沉优选结果羟基红花黄色素A含量指每毫升清膏醇沉后所含有的羟基红花黄色素A的量；去杂率（%）指除去杂质的量占清膏含固量的百分比 2.2.3 醇沉优选结果 由表5可以看出，50%乙醇沉淀时指标成分损失最大，去杂率较好，但沉淀呈泥沙状，滤过困难，可行性较差；60%乙醇沉淀时，指标成分损失较小，去杂效果较好，且沉淀呈絮状，静置后呈块状，易滤；70%乙醇沉淀时，指标成分损