神农香菊提取物的高效液相色谱指纹图谱研究.docVIP

　　神农香菊提取物的高效液相色谱指纹图谱研究 作者：卢金清，詹晓莲，万威，徐玉婷，吴丹慧，曹儒宾，胡晓燕，何雪峰 【摘要】 目的建立神农香菊提取物黄酮类成分高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法采用反相高效液相色谱法， 色谱柱为DIONEX-ACCLAIM.120 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为 磷酸盐缓冲溶液（pH=2.5）-甲醇(梯度洗脱)；流速为0.8 ml/min；柱温35 ℃；检测波长350 nm。结果建立了神农香菊提取物黄酮类成分HPLC指纹图谱，标定了16个共有指纹特征峰，方法学考察符合指纹图谱技术要求。结论方法稳定，可靠，精密度高，重复性好，可为神农香菊提取物质量标准的制定提供 科学 依据。 【关键词】 神农香菊； 提取物； 高效液相色谱； 指纹图谱 　　Abstract：ObjectiveTo establish the HPLC fingerprint spectrum of flavonoids in extract of Dendranthema indicum. MethodsThe HPLC conditions n（250mm×4.6mm，5μm）obile phase ethy1 cyanide and pBS(pH=2.5) l/min;column temperature , and the recording time in. ResultsTen mon characteristic peaks ent.ConclusionThe method is stable， reliable， precise and it provides a scientific basis for the quality standard of the extract of Dendranthema indicum. 　　Key a indicum; Extraction; HPLC; Fingerprint Spectrum 　　神农香菊提取物为菊科植物神农香菊Dendranthema indicum (L．) Des Mon1．var．aromaticum Q.H.Liu et S．F．Zhang的干燥头状花序［1］经加工制成的提取物，具有疏风清热、平肝明目、散风降压的功效，其主要化学成分为黄酮类化合物，它可用于医药、饮料、香烟及化妆品等产业。 　　表1 不同来源的神农香菊样品（略） 　　表2 流动相梯度洗脱表（略） 　　2.3 方法学考察及相似度 计算 　　2.3.1 精密度研究 精密吸取1号供试品溶液5 μl，按“2.1”项色谱条件，连续进样5次，以木犀草素峰(峰8)作为参照峰，指定其α值为1.000，考察仪器精密度，各特征指纹峰相对保留时间和特征指纹峰相对峰面积分别在0.3%～2.1%和0.2%～2.1%之间，均小于3%，符合指纹图谱的要求。 　　2.3.2 稳定性研究取同一3号供试品溶液，按“2.1”项色谱条件，分别于0，3，6，9，12，24h进行检测，以木犀草素峰为参照，指定其α值为1.000，考察供试品溶液的稳定性，各特征指纹峰相对保留时间和特征指纹峰相对峰面积分别在0.2%～1.2%和0.4%～2.6%之间，均小于3%，符合指纹图谱的要求。 　　2.3.3 重复性研究 取本品5号粉末（过2号筛）5份，每份0.2 g，精密称定，照“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，以木犀草素峰为参照，指定其α值为1.000，考察方法的重复性，各特征指纹峰相对保留时间和特征指纹峰相对峰面积分别在0.1%～1.0%和0.7%～2.4%之间，均小于3%，符合指纹图谱的要求。 　　2.4 指纹图谱及技术参数 取样品粉末（过2号筛）10批，每份0.2g，照“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进行测定。选定木犀草素峰作为参照，指定的α值为1.000，特征指纹峰相对保留时间和特征指纹峰相对峰面积（ 自然 对数相对比）的结果见表3～4。 　　表3 神农香菊提取物共有特征指纹峰相对保留时间（略） 　　表4 神农香菊提取物共有特征指纹相对峰峰面积（略） 　　通过对10批神农香菊提取物指纹图谱的HPLCFPS和不同样品间HPLCFPS的比较，建立神农香菊药材对照指纹图谱，各样品指纹图谱特征峰与对照指纹图谱特征峰有良好的重复性，神农香菊指纹图谱应有16个特征峰。见图1～2。 　　2.5 相似度计算 根据 中国 药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版，计算了神农香菊10批提取物的相似度，结果分别为0.911，0.9。 　 　3 小结 　　3.1 色谱柱选择研究 本实验研究选用十八烷基硅烷键合硅胶