蛋白质结构与功能精要.ppt

蛋白质的主要生理功能 生物体内的氨基酸类别 （一）氨基酸的分类 构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区(220nm)均有光吸收。 在近紫外区(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。 酪氨酸的?max＝275nm，?275=1.4x103; 苯丙氨酸的?max＝257nm，?257=2.0x102; 色氨酸的?max＝280nm，?280=5.6x103; 氨基酸与茚三酮反应 氨基酸与苯异硫氰酯（PITC）的反应（Edman反应） 氨基酸与2,4一二硝基氟苯(DNFB)的反应（sanger反应） 肽 肽和肽键的形成 肽键的特点： 肽键的特点： 氨基酸在形成肽链时丢失了一分子水，肽链中的氨基酸分子已不完整， 谷胱甘肽 由下丘脑分泌，其功能是促进腺垂体释放促甲状腺素(调节糖代谢)。 蛋白质结构的主要层次 一、蛋白质的一级结构 蛋白质一级结构的概念： 蛋白质分子中所有氨基酸的排列顺序，称~ 一级结构中的主要化学键： 肽键，二硫键 氨基酸序列书写： 以氨基末端开始~羧基末端结束，依次编1、2、3……… 一级结构测定 蛋白质顺序测 定基本战略 二、蛋白质二级结构 概念： 是指蛋白质分子中一段多肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及到aa侧链R基团的构象。 肽单元（肽平面）： 肽键的6个原子Cα1 、C、N、O、H、 C α2位于同一平面，构成所谓的肽单元 肽单位 酰胺平面与α-碳原子的二面角（ φ和ψ ） 完全伸展的多肽主链构象 蛋白质的二级结构类型 （二）β－折叠(β－pleated sheet) 故又称β－折叠片或β－片层。 2. β－折叠结构特点 （三）β－转角(β－turn) (五) 蛋白质的超二级结构和结构域 超二级结构类型 三 蛋白质的三级结构 卵溶菌酶的三级结构中的两个结构域 维持蛋白质分子构象的作用力a.盐键 b.氢键 c.疏水键 d.范得华力 e.二硫键 四 蛋白质的四级结构(quaternary structure) 正常红细胞与镰刀形红细胞的扫描电镜图 不同生物与人的Cytc的AA差异数目 不同生物来源的细胞色素c中不变的AA残基 血红蛋白输氧功能和构象变化 核糖核酸酶变性与复性作用 (四)蛋白质主要呈色反应 双缩脲反应 （五）蛋白质的紫外吸收光谱 二、 蛋白质的分离纯化 (四) 层析 层析种类： 凝胶过滤（分子筛） 离子交换层析（阴离子和阳离子） 亲和层析 四、肽与蛋白质的人工合成 1.原料 aa 2. 保护剂 与-NH2或-COOH 反应，易去掉 3.缩合剂 4.-COOH 、-NH2活化剂 合成步骤 α-NH2和α-COOH 的保护与活化 接肽反应 脱去保护剂 四、蛋白质空间结构的测定 本章小节 蛋白质的生物学作用：功能蛋白、结构蛋白 蛋白质的组成（元素组成、化学组成）及蛋白质含量的测定 二十种氨基酸的结构、分类及名称（三字缩写符、单字缩写符） 氨基酸的重要理化性质：两性解离、茚三酮显色、与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应 蛋白质的一级结构：肽、肽键、活性多肽及一级结构的测定 蛋白质的空间结构：二级结构单元（ ?-螺旋、?-折叠、 ?-转角、自由回转）、三级与四级结构（超二级结构、结构域、亚基）及结构与功能的关系 蛋白质的性质：大分子性质、蛋白质分子量的测定（离心法、凝胶过滤法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法）、两性解离（等电点、电泳、离子交换）、胶体性质、蛋白质沉淀（可逆沉淀、不可逆沉淀）、蛋白质变性、紫外吸收及颜色反应 蛋白质的分类：按外形及组成分类 问 题 1. X射线晶体衍射法 X-衍射图代表射线穿过（蛋白质）晶体的一系列平行剖面的各原子的电子密度，然后再借助计算机绘制出三维的电子密度图。 2.二维磁共振技术 3. 蛋白质空间结构的预测 （1）根据分子力学、分子动力学、物理化学原理，从理论上计算推测蛋白质的空间结构 （2）从已知蛋白空间结构规律，从一级结构推测空间结构。 Native ribonuclease Denative reduced ribonuclease Native ribonuclease 8 M urea and ?-mercapotoethanol Dialysis 变性 复性 当破坏了维持蛋白质胶体稳定的因素甚至蛋白质的构象时，蛋白质就会从溶液中析出，这种现象称为蛋白质的沉淀。 2. 蛋白质的沉淀(pre-cipitation) 概念: 应用: (1)蛋白质分离纯化 (2)解毒 (3)临床检验 (1) 盐析法( salting out)