血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳精要.ppt

醋酸纤维电泳的特点 优点：简单、快速、定量等，区带清晰，灵敏感度高，便于保存和照相。 缺点：较聚丙烯酰胺电泳分辨率低。聚丙烯酰胺电泳有两重效用：电泳和分子筛。 * * 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 目的 　　了解电泳技术的一般原理，学习醋酸纤维薄膜电泳的操作 实验原理 带电粒子（为胶体粒子）在电场中向与自身带相反电荷的电极移动，称为电泳。 不同物质由于带电性质不同，因而在一定的电场强度下移动的速度不同。 以氨基酸为例： qU= ─ mv2 1 2 在某种pH下，某一AA可显电中性，即带着相等的正负离子（呈兼性离子），此时若在电场中，这一AA既不向正极移动，也不向负极移动，这一pH值被称为这一AA的等电点，以PI表示，AA是一种典型的两性电解质。 一个混合的蛋白质样品由于各蛋白质的等电点不同，在相同的pH溶液中所带的电荷性质不同，电荷的数目不同，在电场中各种蛋白质泳动的速度和方向也不相同。从而使蛋白质混合样分离开来。 溶液的pH值：溶液的pH值决定了带电颗粒的解离程度，也决定了物质所带净电的多少。对蛋白质和氨基酸等两性电解质而言，pH值离等电点越远，颗粒所带净电荷越多，泳动速度也越快，反之越慢。因此，分离某一蛋白质混合物时，应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差异的pH值，以利于各种蛋白质的分离。 为使电泳过程中溶液的pH值恒定，必须使用缓冲溶液。本次实验使用的是巴比妥-巴比妥钠缓冲溶液。pH为8.6。 实验步骤 1. 平衡 　　选择质地均匀的膜条浸透在缓冲液中10分钟左右，取出用滤纸吸干多余的水份。 2. 点样 　　识别出光泽面与无光泽面，平放于滤纸上，在无光泽面距膜一端2cm处用点样器点样。点样一定要均匀。这是实验成败最关键的一步。 ３. 电泳 　　点样一面朝下，放入电泳槽中，点样端放在阴极 ，调节电流，电泳时间45-60分钟左右或在点样处点一点溴酚兰作为指示。 电流强度为：0.7mA/cm膜宽，每片膜宽约2cm左右。每个电泳槽大概放十片膜，因此电流为0.4-0.6mA左右，电压为90-120mV。