基因疫苗脾内免疫制备抗人c-kit单克隆抗体及其初步鉴定.pdfVIP

• 644 • 史盟盘盘盘盘盘旦随坐塑且盎 基因疲苗脾内免疫制备抗人 c-kit 单克陆抗体及其初步鉴定 石琳何大水冯春玲袁向飞屈情黄丽华张丽艳王冬梅张毅张字光 (中国眩学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院，天津 300020) 中固阁书分类号 R392.1l 文献标识码 A 文章编号 100(弘物4X(2栅)07.嗣牛06 [摘 要] 目的:用基因脾内免疫方法制备抗人 c-kít 单克隆抗体，并通过对抗体生物学特性的初步研究，确定该方法制 备抗体的可行性。方法:利用分子克隐方法构建意组质粒 peDNA3.lIc-kít 胞外区，脾内免疫日丛.B/c 小鼠一次，通过杂交瘤技 术制备抗人 c-kít 单克隆抗体。采用流式细胞术、W制tem blot 方法初步鉴定制备的抗体。结果:目的基因片段 c-kit 胞外匹配确 插入股粒 pcDNA3 .1 ，重组质粒免疫小鼠后通过杂交瘤技术搅得了二三株分泌抗人 c-kít 胞外区的杂交瘤细胞株 6C4，2臼和5时， 其亚樊均为 IgM粪，识别不同的抗原表位，其特异性与抗人盼kit 抗体一致。结论:可用基因脾内一次免疫法制备抗人阶kít 单 克隆抗体。 {关键词] c-kit; 基因免疫;单克除抗体 Production of an协human c-kit monoclonal antibodies by direct intra唰spleen injec嗣 tion of DNA vaccine SHI μn ， HE Dα-Shui , FENG Ch肌幡μng ， 民闭NXìωng州， QU Hcω， HUANG μHua ， ZHANG μYan ， WANG Dong- Mei ， ZHANG 盯 ， ZHANG Yu- Guang. Department 0/111JI阳附加盯， lnstitute of Hematology B.阳xl Dise即es Ho哥pital ， Chi- nese Ac，αdemy 0/Medical 加ences Peking Unwn Medical College , Tianjin 3仅lO20 ， China [AbstI唰] Obj创ve:To pre阳e anti占l\lman c-kít monocl叫antibody(McAb) by g栅tic immwùzation in spl创川ldω 也temúne practicability of th创e me刷18 切 produce McAbs ba刷1 on the biological acti叽ty of anti-hurnan c州t antibody. Meth例如: Recombinant plasmid pcDNA3.l/c占it extracellular domain was constructed by 1Il01优ular cloning tec阳úques ， and wasωdωimmur世ze BALB/c mice in spleen di- recÙy 10 pre阴阳 mAb againsl hurnan c-kit by routine hybridoma techni甲e.FASC 、 fluore附nce núcrosco严 and Westem blot were utilized to i- dentify 由。 pre阴阳:d anti灿dy. Results: c-kít e柑回cellular region was c10ned and insert pcDNA3. 1 plasnúd successfully.ηJree hybridoma c晴U lines 6CA .2C5 and 5D5 山at secrete anti-hωnan c-kit McAbs were obtain叫 after using intra-spleen immur甘zation with a DNA vaccine. The iso- types of the附 thl明 antibodies were all 1酬，肌d the 叩itopes were different withωch 0出er.CωlClusi阳:啊le 1Il耐。d of genetic immunizat