基因病的诊断(总2012).ppt

概 述 单基因病 ：指由于单个基因的突变而引起的遗传 病，其遗传方式符合孟德尔定律。 人类大约有3万个基因，目前约有2000个单基因病的致病基因被鉴定。 基因诊断： 利用分子遗传学技术在DNA或RNA水平上对某一基因进行突变分析，从而对特定的疾病进行诊断。 多数单基因病目前尚无有效的治疗。 对于一些严重的单基因病可通过基因诊断和产前诊断的方法，避免再生育患儿。 假性肥大型肌营养不良 脊髓性肌肉萎缩症 非综合征性耳聋 脆性X综合征 假性肥大型肌营养不良 DMD疾病介绍 Duchenne muscular dystrophy （DMD） 假肥大型（进行性）肌营养不良 杜氏肌营养不良 儿童最常见的致死性肌肉疾病 遗传方式：X连锁隐性遗传 发病率：1/3500 活产男婴 DMD临床特征 3～5岁隐袭起病，病情进行性加重，9 ～12岁不能行走，多于20岁左右死亡。 学步较晚，不愿意行走或跑、行走缓慢，活力下降、易于跌倒、不能跳跃、上楼困难。 90%有肌肉假性肥大，腓肠肌最明显，触之坚韧。 鸭步：骨盆带肌肉无力。 Gower征：自仰卧位起立时，先翻身转为俯卧位，屈膝、髋关节，用手按压膝部以辅助股四头肌的肌力，双手攀附下肢缓慢地站立。 肩胛带肌受累松弛，呈游离肩；前锯肌和斜方肌萎缩无力，两臂前推或上举时，肩胛骨呈翼状竖立于背部，称翼状肩。 大多数伴心肌损害，少数可出现充血性心力衰竭。 30%患儿有不同程度的智力障碍。 腱反射减弱，直至消失 肌酶：CK等活性明显升高 肌电图：肌源性损伤 免疫组化：蛋白消失或减少。 晚期多因呼吸道感染，心力衰竭死亡。 BMD：贝氏肌营养不良，临床特征同DMD，发病年龄较晚，进展缓慢，病情较轻，存活期长。 DMD基因 定位： 位于Xp21 结构： 全长2.5Mb，是人类最大基因； cDNA长14Kb，含 79个外显子。 功能：表达 dystrophin蛋白，具有细胞支架、抗牵拉、防止细胞膜在收缩活动时撕裂。 突变类型： 缺失型：60—65%； 点突变和微缺失：30%；重复型突变： 5% 发病机制 DMD基因 ↓ dystrophin蛋白 ↓ 与肌膜上的其他蛋白形成DAPC复合体 ↓ 在细胞外基质和细胞骨架蛋白之间形成一个跨膜结构 ↓ 保护肌纤维和肌膜在长期的反复机械收缩过程中免受损伤和坏死 DMD基因检测方法 18个外显子的多重PCR技术 连锁分析——单体型分析 胎儿性别鉴定 变性高效液相色谱——DHPLC 基因测序 多重PCR技术 多重PCR（ mPCR） 在一个PCR体系中由多对不同的引物同时扩增多个不同的DNA片断。 DMD基因两组9重PCR A组：4、8、17、19、44、45、48、51、60 号外显子 B组：Pm 、3、6、12、13、43、47、50、52号外显子 突变检出率：60%左右。 连锁分析 目的：检测携带者 非缺失型的产前诊断 与mPCR联合分析 方法：在DMD基因内部及下游200kb范 围选择11个杂合度较高的微卫星 （STR）位点，进行单体型分析 11个微卫星位点详细情况 PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 银染显色 各重复片断存在多种形式 长度最小的重复片段命名为1 依此类推 胎儿性别鉴定 原理：检测性别决定基因SRY 方法：两重PCR扩增SRY、DMD6号外显 子（内对照） 分析：SRY基因和内对照均有产物为男性 有内对照产物而无SRY产物为女性 DHPLC技术 变性高效液相色谱 （Denaturing High Performance Liquid Chromatography，DHPLC） 是一种用离子对反向高效液相色谱法分离并检测异源双链，从而高通量筛选DNA序列变异的技术， 其专利产品为WAVE DNA片段分析系统。 DHPLC的核心组成 分离柱