怎样选择色谱柱_液相色谱柱的种类与方法开发[毕业论文].ppt

优点： 平均孔径了粒径范围可控（1.7, 1,8, 2.7, 3, 5, 10 μm） 机械强度高－耐压，稳定 柱效最高 兼容有机溶剂 表面性质易于修饰 缺点 碱性条件下溶解 表面酸性不适宜分离碱性化合物 * 优点： 平均孔径了粒径范围可控（1.7, 1,8, 2.7, 3, 5, 10 μm） 机械强度高－耐压，稳定 柱效最高 兼容有机溶剂 表面性质易于修饰 缺点 碱性条件下溶解 表面酸性不适宜分离碱性化合物 * 优点： 平均孔径了粒径范围可控（1.7, 1,8, 2.7, 3, 5, 10 μm） 机械强度高－耐压，稳定 柱效最高 兼容有机溶剂 表面性质易于修饰 缺点 碱性条件下溶解 表面酸性不适宜分离碱性化合物 * 优点： 平均孔径了粒径范围可控（1.7, 1,8, 2.7, 3, 5, 10 μm） 机械强度高－耐压，稳定 柱效最高 兼容有机溶剂 表面性质易于修饰 缺点 碱性条件下溶解 表面酸性不适宜分离碱性化合物 * 优点： 平均孔径了粒径范围可控（1.7, 1,8, 2.7, 3, 5, 10 μm） 机械强度高－耐压，稳定 柱效最高 兼容有机溶剂 表面性质易于修饰 缺点 碱性条件下溶解 表面酸性不适宜分离碱性化合物 * NH2使用H2O作为MP时，NH2－NH3R＋，水为碱性，硅胶被溶解 Sil寿命，pH=7-8时溶解，表面没有任何保护，容易死吸附，稳定性，重现性不好。 HILIC首推酰胺，然后Diol * 固定相对色谱柱性能的影响：基质表面特性+键合类型 〉反相键合相的保留行为 同一厂家相同硅胶基质的反相柱： 保留值随含碳量的增加而增加 比表面积越大，保留值越大 键合碳链越长，保留越大 C18 C8C3C1，长链之间差别不大 ≈ 反相键合相的保留行为 不同厂家色谱柱的 保留值，选择性与峰型 色谱柱：4.6*150mm，流动相：乙腈－0.05M磷酸钾缓冲液，pH3.2(65:35);流速：1ml/min， 拖尾峰 T0（尿嘧啶） P: 吡啶 L: 苯酚 N: N,N-二甲基苯胺B: 4-丁基苯甲酸 J: 甲苯 固定相对色谱柱性能的影响： 基质表面特性+键合类型 〉键合相的稳定性 键合相的稳定性 低pH值，键合相流失 高pH值，硅胶溶解 影响色谱柱寿命，方法不重现 键合类型对键合相稳定性影响 低pH值，键合相流失 键合类型对键合相稳定性影响（II） 空间位阻保护，延缓键合相流失 固定相对色谱柱性能的影响： 键合硅胶的稳定性 高pH值，硅胶基质溶解 pH9时，色谱柱的稳定性 固定相对色谱柱性能的影响： 键合硅胶的稳定性 碳杂化，延硅胶缓高pH值水解 杂化颗粒： Waters Xterra 表面碳杂化示意图 pH=12 条件下的稳定性 4 amines, ACN/ 1% Ammonia aqueous= 25%:75%, 40oC, 4.6 x 150 mm, 5um 1h 200 h 总结：如何选择色谱柱和相应的色谱条件 了解目标化合物的性质：结构（官能团）、pKa、分子量、浓度范围、溶解度、极性 了解色谱柱的性质 粒径，孔径，比表面积 保留强度和柱效；抗污染性 基质表面特性，键合类型保留强度，选择性，柱效，对称性，灵敏度，稳定性和重现性 选择相应的色谱条件 色谱柱选择　（ＩＩ） 替代：粒径，比表面，基质表面特性，键合类型相似 新方法开发： －粒径：2um vs 3um vs 5um （分析时间，灵敏度，仪器，价格，寿命） －内径／柱长：内径3mm vs 4.6 vs 7.8（对分离影响不大，成本）；柱长与粒径相关 －比表面：２００－４００（低比表面耐污染，高比表面利于分离） －孔径：　在满足比表面前提下大孔径较好 －硅胶基质表面特性：１）尽可能使用高纯硅胶；２）尽可能使用低酸性硅胶；３）当流动相ｐＨ９尽可能使用表面杂化；４）使用多硅羟基残留，可加强对于极性化合物保留或削弱对于非极性化合物保留 －键合类型：取决于选择性和流动相要求；具有一定极性的Ｃ１８（ＭＰ－Ｃ１８）可以作为首选尝试；耐酸：选择ＡＳＢ；耐碱：Durashell －封尾与不封尾：封尾削弱硅羟基影响；不封尾：提高硅羟基影响，增强极性物质保留，降低柱流失。 ＳＢ－Ｃ１８ ＭＰ－Ｃ１８ ＭＰ－Ｃ１８ 乙腈／水 乙腈／水 乙腈／水,KH2PO4 pH=4.2 优点： 平均孔径了粒径范围可控（1.7, 1,8, 2.7, 3, 5, 10 μm） 机械强度高－耐压，稳定 柱效最高 兼容有机溶剂 表面性质易于修饰 缺点 碱性条件下溶解 表面酸性不适宜分离碱性化合物 * 。 。 。 。 。 。 。 优点： 平均孔径了粒