抗体的人工制备[论文设计].ppt

抗体的人工制备 人工制备抗体 多克隆抗体 （polyclonal antibody ） 单克隆抗体 （monoclonal antibody ） 基因工程抗体 （genetic engineering antibody) （一）多克隆抗体（polyclonal antibody(PcAb) 用传统方法将抗原物质免疫动物, 由于这些物质由多种抗原分子组成或由多种抗原决定簇组成, 可刺激不同淋巴细胞克隆, 产生多种Ig, 即多克隆抗体。 由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体，具有高度的异质性。 缺点 它不能针对某一特定表位，特异性不高，常出现交叉反应； 同时也不易大量制备，其应用受到限制。 多克隆抗体主要来源于 动物免疫血清 恢复期患者血清 免疫接种人群 PcAb制备的基本过程 抗原制备 动物免疫 试血测定抗体效价 血清分离与保存 多抗纯化与标记 用于制备抗血清的动物 小鼠、 大鼠、 兔、 羊、 马等大动物。 （二）单克隆抗体 （monoclonal antibody ，McAb） 由单一B细胞克隆针对某一抗原决定簇产生的完全均一的只对某一抗原决定簇起反应的特异性抗体, 即为单克隆抗体。 通过杂交瘤技术获得。 针对一个抗原决定簇 由一个B细胞分化、增殖产生的子代细胞集团产生的， 针对一个抗原决定簇的抗体，即由单一B细胞克隆合成的抗体。 特点： 1.高度均一性 2.高度专一性 3.大量产生 4.及稳定性 应用 作为诊断试剂用于许多血清学检测; 已广泛应用于疾病的诊断、 特异性抗原或蛋白的检测和鉴定、 疾病的被动免疫治疗 或与核素、毒素、化学药物偶联导向药物, 用于肿瘤治疗。 单克隆抗体的生产 动物体内生产系统 细胞培养生产系统 动物体内生产系统 将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔，杂交瘤细胞可在小鼠腹腔中无限繁殖，导致腹水产生，每毫升腹水可获得5~20mg的单克隆抗体，一般一次可收腹水5~10mL,间隔3~4d 采一次，可多次反复采集。 选择培养基 常用HAT选择培养基，H为次黄嘌呤（hypoxanthine）,T为胸腺嘧啶核苷（thymidine)，二者都是旁路合成DN A的原料；A是氨基喋呤（ aminoplerin）,是细胞合成DNA的阻断剂。 在DMEM培养基中加入 H、A、T三种成分即制成HAT选择培养基，在该培养基中，未融合的骨髓瘤细胞不能生长，因它缺乏HGPRT酶下能利用旁路途径合成DNA，内源性的合成又受到氨基喋呤的阻断；至于未融合的脾细胞则在2周内自然死亡．所以只有融合的杂交瘤细胞才能在该培养基中生长。 细胞培养生产系统 悬浮培养系统 细胞固定化培养系统 单克隆抗体应用 ①单克隆抗体被广泛用作诊断检测试剂，提高了常规免疫学检测技术在疾病诊断和分析研究中的敏感性、特异性、准确性和检测速度。 ②单克隆抗体可与同位素、毒素、细胞毒类药物通过化学偶联制备成导向药物（生物导弹），用于肿瘤、自身免疫性疾病治疗和防治移植排斥反应等。 单克隆抗体应用 ③单克隆抗体可用作生物活性药物的纯化试剂。 单克隆抗体与多克隆抗体比较 单克隆抗体与多克隆抗体比较 但是由于人-人杂交瘤的技术限制，目前绝大多数单克隆抗体是鼠源性的。 由于是异种抗原，重复体内使用鼠源性抗体将促使机体产生抗鼠Ig的抗体，不仅降低临床疗效，亦可能引起严重的超敏反应，因而限制了其临床应用。 （三）基因工程抗体 : 人-鼠嵌合抗体、改型抗体、双特异性抗体、小分子抗体、人源化抗体。 可保持单克隆抗体均一性、特异性强的优点, 又能克服其为鼠源性的不足。 ?由基因重组技术制备的抗体称为基因工程抗体(gene engineering antibody，GeAb)，也称第三代人工抗体。 其原理是由B细胞获得编码抗体的基因，或以聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)体外扩增抗体基因片段，经体外DNA重组后，转化受体细胞，使其表达特定抗体。 目前已成功表达的基因工程抗体有嵌合抗体、重构建抗体、单链抗体等，其中嵌合抗体研究较多。 另外重组噬菌体抗体(recombinant phage antibody)是近年以重组噬菌体展示系统制备的GeAb。 将抗体VH、VL基因经体外PCR扩增后与噬菌体外壳编码基因连接，重组后可在噬菌体表面表达抗体融合蛋白，经固相抗原吸附技术很容易筛选出表达特异抗体的噬菌体用以大量表达和制备抗体。 抗体基因片段的获得 从B细胞DNA库中筛选； 用探针从杂交瘤细胞、免疫脾细胞的DNA库或cDNA库中筛选； 以PCR法直接扩增。 一、嵌合抗体（Chimeric antibody) 是指在同一抗体分子中含有不同种属来源抗体片段的抗体，又称杂种抗体。 迄今构建的嵌合抗体多为“鼠-人”类型，