老龄兔骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死最佳剂量的研究.docVIP

　　老龄兔骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死最佳剂量的研究 作者：王晔玲 郑连文 夏敏杰 郭雪华 【摘要】 目的 探讨老龄兔骨髓间充质干细胞移植 治疗 心肌梗死的最佳剂量，为细胞移植治疗心肌细胞坏死性相关疾病提供前期的实验依据。方法 选择≥36个月龄的新西兰大耳白兔30只，建立心肌梗死模型，将造模成功兔随机分为4组(空白对照组、4×104低剂量组、4×105中剂量组、4×106高剂量组)，每组5只；在心肌梗死1天后，用微量注射器抽取200 μl密度为2×105/ml、2×106/ml、2×107/ml标记后的细胞悬液(剂量分别为4×104、4×105、4×106个)，分别多点注射在心肌梗死区，空白对照组注射等量生理盐水，8 al dose of the marroa cells (MSCs) transplantations after myocardial infarction (MI), and to provide prophase experimental basis for the treatment of the diseases correlated to cadiocyte necrosis by cells transplantation.Methods Thirty Neonths onths rabbit equaled to a 60 years old person). Model of MI ade by anterior descending branch band. The modelbased rabbits ly divided into 4 groups (control group; 4×104 looderate dosage group; 4×106 high dosage group, n=5). The 200 μl cells after the mark ultiple positions of myocardium in 1 d after MI l-1 separately. The control group eters; blood floodynamics at Eightheasued. Results pared eters; blood floodynamics in 4×105 group and 4×106 group e time of MI and the different celldensity. 【Key al stem cells(MSCs)；Myocardial infarction；Cell transplantation 　　心肌缺血后取代受损心肌进行细胞移植术被认为是有潜力的治疗方法 〔1〕，称为细胞心肌成形术。国内外动物与临床实验研究证实骨髓间充质干细胞(MSCs)移植可修复受损的心脏，改善心功能〔2，3〕。干细胞移植治疗心肌梗死以及晚期心功能不全正日益成为一种新的治疗方法〔4〕。MSCs由于能够自我复制，具有分化的多功能性,并且无免疫排斥反应，因而在临床中具有广泛的应用前景〔5〕。但尚未解决的问题很多，其中选择多少细胞移植剂量才能达到最大临床效益且费用最小是细胞移植领域备受关注且尚未解决的课题。本实验通过建立体外老龄兔骨髓MSCs培养体系，观察老龄兔在心肌梗死相同时间以不同剂量细胞进行MSCs的移植对心功能的影响，探讨合适的细胞移植剂量。为细胞移植治疗心肌细胞坏死性相关疾病提供前期的实验依据。 　　 1 材料与方法 　　1.1 动物与设备 　　选择≥36个月龄(36月兔相当人60岁左右，为老龄兔)的新西兰大耳白兔，体重1.5～3.3 kg，雌雄不拘，由吉林大学基础医学院动物实验室提供。高速低温离心机：icro 22R(德国)；CO2孵箱：SANYO MCO17AIC(日本)；5氮胞苷：(购自美国Sigma);鼠抗BrdU单克隆抗体：(购自美国Sigma)；5溴脱氧尿嘧啶(BrdU)：双染试剂盒(福州迈新生物公司)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 兔心肌梗死模型的建立 　　实验用兔以硫贲妥钠25 mg/kg经耳缘静脉注入麻醉后，气管切开，呼吸机控制呼吸，潮气量15 ml/kg，频率45次/min，FiO2 21%，胸正中切口锯开胸骨，打开胸腔，显露心脏，可见心包及搏动的心脏。提起心包膜，将心包膜前部轻轻撕开，然后用止血钳将左心耳轻轻提起，找到冠状动脉前降支，再用持针器持小圆弯针在左冠状动脉前降支根部穿一根零号医用缝合线结扎，关闭胸腔后拔出气管插管，术后1～2 h做心电图检查，证实有ST段抬高性心肌梗死，术后每日肌注青霉素800 000 U，1 l)，重新接种细胞(包括爬片数张)，完全培养液中加入10 mmo