6-氰基-（3足5及）二羟基己酸叔丁酯合成的补料生物转化工艺.pdfVIP

第 31卷 第 5 期 化学反应工程与工艺 Vol 31, No 5 2015年 10月 Chemical Reaction Engineering and Technology Oct. 2015 文章编号：1001—7631 ( 2015 ) 05— 0443—06 6-氰基-(3足5及)二羟基己酸叔丁酯合成的补料生物转化工艺 刘小青，王亚军，沈伟良，罗希，郑裕国 浙江工业大学生物与环境工程学院，浙 江 杭 州 310014 摘要: 通过对羰基还原酶工程菌五■⑶ // BL21/pET28a(+)-cr与葡萄糖脱氧酶工程菌五. co// BL21/pET28a(+)-g洲 的全细胞协同生物转化工艺进行优化，实现高浓度投料的6-氰基-(5尺)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯[(5尺)-CHOHB] 不对称还原合成6-氰基-(3尺，5尺)- 二羟基己酸叔丁酯[(3尺，5尺)-CDHHB] 。采用全细胞分批转化方式，确定底物 (5尺)-CHOHB 和葡萄糖的一次性投料浓度为300 g/L 。进一步考察了补料转化方式对提高转化效率的影响。结 果表明，相对于一次性投料的全细胞分批转化工艺，采用连续补料方式和分批补料方式均能使底物投料量达 至1J 400 g/L 。相对于以往报道，底物投料量提高了 33.3% ，产物(3尺，5尺)-CDHHB 非对映体过量值U e . 值）为 99.5% ，具有良好的工业应用前景。 关键词：补料生物转化羰基还原酶6-氰基-(5尺)- 羟基-3-羰基己酸叔丁酯6-氰基-(3足5尺)-二羟基己酸叔丁酯 中图分类号：Q555+.6 文献标识码： A 阿托伐他汀是临床上治疗高血脂症的首选药物[1]，作为甲羟戊二酸单酰辅酶A (H M G -C oA )还原酶 抑制剂，能有效抑制H M G -C o A 向甲羟戊酸的还原性转化，降低了低密度脂蛋白胆固醇的水平，达到 降低血脂的目的[2,3]。6-氰基-(3及5外二羟基己酸叔丁酯[(3及5尺)-C D H H B ]是合成阿托伐他汀的关键手 性中间体[4]，含有两个手性中心。化学法合成(3尺，5尺)-C D H H B 需要使用易燃试剂硼烷[5]，且差向选择 性诱导不充分，产物光学纯度低。生物催化具有高对映体选择、高区域选择性以及环保低耗的优势， 在倡导绿色环保低碳节能的大趋势下，采用生物催化技术合成(3及5A )-C D H H B 具有优势[6,7]。 羰基还原酶来源广泛，是一种具有高度的化学、区域和立体选择性的生物催化剂，常用于生物还 原前手性酮制备手性醇[8]。近几年来，用羰基还原酶作为生物催化剂参与合成(3及5A )-C D H H B 的研究 与工业应用日益増多，曹政等[9]在研究中所用底物(5A )-C H O H B 质量浓度达到了 200 g/L ，且底物转化 率达到100%，产物非对映体过量值（d e .)大于99.5%。本课题组前期己经成功开发了羰基还原酶工 程菌£. co// B L 21(DE3)/pET 28a (+)-c r 与葡萄糖脱氢酶工程菌£. co// B L 21/pET 28a (+)-g 滿双菌破碎液协 同催化6-氰基-(5尺)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯[(5尺)-CHO HB ]选择性还原合成(3足5尺)-C D H H B 的技术[9-11]， 如 图 1 所示。由于细胞内源性N A D P+足够满足反应要求，该工艺无需添加外源性辅酶I I ，然而，细 胞破碎处理増加了酶制备的操作成本，且会降低酶的稳定性。同时，在有机溶剂/水两相中进行的微 生物催化反应，有机溶剂作为反应介质的一个重要障碍是有机溶剂一般都对微生物有明显的毒害作用。 de 8肪《等[12]在研究有机溶剂对大肠杆菌的影响中发现，在一定浓度有机溶剂存在情况下，细胞膜会 从片层的双层状态变成蜂窝状，显然，有机溶剂的介入对细胞膜结构造成了影响，破坏了其完整性。 考虑到以上涉及到的因素，本研究考察双菌全细胞协同催化的可行性，并适时建立(3足5尺)-CDHHB 的补料生物转化工艺。 收稿日期：2015-04-07