含his标签水通道蛋白AqpZ的体外表达和功能表征.pdfVIP

第43卷 第 12期 化 学 工 程 Vo1．43No．12 2015年 12月 CHEMICALENGINEERING(CHINA) 含 his标签水通道蛋 白AqpZ的体外表达和功能表征 王钦沪 ，杨修亮 ，黄 磊 ，蔡 谨 ，徐志南 (1．浙江大学 化学工程与生物工程学院，浙江 杭州 310027；2．山东金城生物药业公司， 山东 淄博 255130) 摘要：利用大肠杆菌无细胞表达系统可溶性表达含 his标签的水通道蛋 白Z(AqpZ)， 并经镍柱亲和层析纯化 ，浓缩 得到质量浓度为490 mL的AqpZ。将纯AqpZ重构到DOPC脂质体中，嵌入率为57％。用停留光谱定量分析了 AqpZ的滤水功能，测得其水渗透因子P值为(258．1±8．9)txm／s，约是对照组未嵌入AqpZ的空脂质体的2．8倍。 采用静电吸附、层层 自组装的方法制备嵌入AqpZ的仿生纳滤膜。用截留反渗透装置分析其水通量和NaC1截留 率，结果表明：与未整合AqpZ的膜相比，嵌入含his标签 AqpZ的仿生膜的水通量明显高于对照，且保持较高的截 盐率。本研究为进一步研究水通道蛋白和仿生膜打下了坚实的基础。 关键词：AqpZ；无细胞表达系统；停留光谱；仿生膜；水通量；截盐率 中图分类号：Q816 文献标识码：A 文章编号 ：1005-9954(2015)1243058-04 D0I：10．3969／j．issn．1005-9954．2015．12．014 Cellfreeexpression andfunction characterization ofAqpZ with histag WANGQinh·u ，YANGXiu·liang ，HUANGLei，CAIJin，XUZhi-nan (1．CollegeofChemicalandBiologicalEngineering，ZhejiangUniversity，Hangzhou310027， ZhejiangProvince，China；2．ShandongJinehengBiologicalPharmaceuticalCompany， Zibo255130，ShandongProvince，China) Abstract：Solublehis—tagAqpZwasexpressedusingE．colicell—freeexpressionsystem，andwaslatelypurifiedby Ni一 一NTA affinitychromatograph．Finally，490 mLAqpZ solutionwasobtainedaftertheconcentration．Then thepurifiedAqpZwasreconstitutedintoDOPCliposomeswiththeingeratedefficiency(57％) Thewaterchannel activityofproteoliposomeswasanalyzedbystopped—flow．Theresultshowsthatosmoticwaterpemr eabilityvalueof proteoliposomeswas(258．1±8．9)m／s，about2．8timesthatofthecontro1．Thehis—tagAqpZembeddedlayer— by—layermembranedemonstratedahigherwaterfluxandNaC1rejectionbecauseofthepresenceofAqpZ．This workcouldbethe~undationforthefurtherstudyofAquaporinsandbiomimetiemembranes． Keywords：AqpZ；cell—fleeexpressionsystem；stopped—flow；biomimeticmembrane；waterflux；NaC1rejection 水通道蛋 白Z(AqpZ)是大肠杆菌细胞膜 中的 在常