应用统计学分析方法优化乳链菌肽发酵培养基.pdfVIP

第 24卷第 6期 化学反应工程与工艺 Vo124，No6 2008年 l2月 ChemicalReactionEngineeringandTechnology Dec．2008 文章编号：1001--7631(2008)06一O562—06 应用统计学分析方法优化乳链茵肽发酵培养基 姜丽艳 李 雪 逯家辉 孟庆繁 滕利荣 (吉林大学生命科学学院，长春 130012) 摘要： 以CM培养基为基础，采用 Plackett—Burman设计法对影响乳链菌肽液体发酵培养基的组分 (蔗 糖，蛋白胨，酵母膏，KaHPO4，NaC1和MgSO ·7H2O)进行了筛选，发现影响乳链菌肽效价的关键因 素为蔗糖，蛋白胨和 KzHPO ，然后采用最陡爬坡实验逼近 3个关键因素的最大响应区域，得出合适的中 心点为蔗糖15．8g／L，蛋 白胨19．0g／L，KaHPO418．3g／L。在此基础上，采用Box—Behnken设计结合响 应面法对影响乳链菌肽效价的关键因素最佳水平作了进一步的研究，最优的培养基组分为蔗糖17．3g／L， 蛋 白胨17．0g／L，KzHPO423．0g／L，酵母膏10．0g／L，NaCI2．0g／L，MgSO4·7H2O0．2g／L。在此培 养条件下 ，得到乳链菌肽效价为 6033IU／mL，是优化前的4．48倍 。 关键词 ： 乳链菌肽 ；Plackett-Burman设计法：Box-Behnken设计 ；响应面法 中图分类号 ： TQ920．1 TQ202．3 文献标识码 ：A 乳链菌肽 (Nisin)是一种微生物代谢所产生的具有很强杀菌作用的天然代谢产物口]，是世界上 公认的安全防腐剂 。乳链菌肽容易被人体消化道中的一些蛋 白酶和胰蛋白酶降解 ，不会在体内蓄积而 引起不 良反应，并且对食品的色、香 、味等无不 良影响，使用它还可以降低杀菌温度 ，减少热处理时 问，因此能改进食品的营养价值、风味、结构和颜色等性状 ，同时还可节省能耗。乳链菌肽本身具有 热稳定性 ，耐酸、耐低温，作为一种理想的天然防腐剂获得越来越广泛的应用[2]。乳链菌肽的产生受 培养基组成的影响很大，与其他乳酸菌一样，营养要求高，需要复合的培养基才能生长 良好 。研究表 明口]，乳链菌肽的生物合成主要受碳源、氮源和磷源的调控 ，优化培养基组分可以提高乳链菌肽的生 物活性。Plackett—Burman实验设计是一种经济而有效的二水平实验方法，可以用较少的实验来达到 分析各因素主效应的效果 ，从众多影响因素中快速地筛选 出显著影响因素 ]。响应曲面法 (Response SurfaceMethodology，RSM)是一种优化生物过程的综合技术，采用该法可以建立连续变量曲面模 型，对影响生物产量的因子水平及其交互作用进行优化与评价，快速有效地确定生物过程的最佳条 件 ，已被广泛用于培养基优化[5卅]。本研究利用 Plackett—Burman设计、最陡爬坡实验和响应面分析 等统计学方法对乳链菌肽液体发酵培养基组分进行优化，得到高活性的乳链菌肽 ，对促进我国绿色食 品的发展和保障人民的健康具有重要的意义。 1 实验部分 1．1 材 料 Nisin产生菌 LactococcuslactissubsplactisATCC11454购于美 国菌种保藏中心。效价检测菌[8] BacillusSubtilisAS1108购于北京微生物研究所。 种子培养基 (g／L)[7]：蔗糖 10．0，蛋白胨 4．5，酵母膏 lO．0，K：HP04·3HO28．4，NaC12．0， MgSO4·7H2O0．2，121℃灭菌 30min。 发酵培养基，分别按照 Plackett—Burman设计、最陡爬坡实验设计和 Box—Behnken设计的方法进 收稿 日期 ：2008—08—04；修订 日期 ：2008一】0-10 作者简介 ：姜丽艳 (1983一)，女 ，硕士研究生；滕利荣 (1954一)，男 ，教授 ，博士生导师 ，通讯联系人 。E-mail：tenglr@jlu．edu．cn 第 24卷第 6期 姜丽艳等．应用统计学分析方法优化乳链菌肽发酵培养基