Genetic Transformation and Analysis of Rice OsAPx2 Gene in Medicago sativa 英文参考文献.docVIP

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2017-05-11 发布于上海
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Genetic Transformation and Analysis of Rice OsAPx2 Gene in Medicago sativa 英文参考文献

GeneticTransformationandAnalysisofRiceOsAPx2 GeneinMedicagosativa QingjieGuan1,TetsuoTakano2,ShenkuiLiu1* 1KeyLaboratoryofSaline-alkaliVegetationEcologyRestorationinOilField(SAVER),MinistryofEducation,AlkaliSoilNaturalEnvironmentalScienceCenter(ASNESC), NortheastForestryUniversity,Harbin,China,2AsianNaturalEnvironmentScienceCenter(ANESC),TheUniversityofTokyo,NishitokyoCity,Tokyo,Japan Abstract TheOsAPx2genefromricewasclonedtoproducePBI121::OsAPx2dual-expressionplants,ofwhichexpressionlevelwould be increasing under stressful conditions. The enzyme ascorbate peroxidase (APX) in the leaves and roots of the plants increasedwithincreasingexposuretimetodifferentsodiumchloride(NaCl)andhydrogenperoxide(H2O2)concentrations, asindicatedbyproteingelblotanalysis.Theincreasedenzymeyieldimprovedtheabilityoftheplantstoresistthestress treatments. TheOsAPx2 gene waslocalizedin thecytoplasm ofepidermal onion cells asindicated by theinstantaneous expressionofgreenfluorescence.An80%regenerationratewasobservedinMedicagosativaL.plantstransformedwiththe OsAPx2geneusingAgrobacteriumtumefaciens,asindicatedbyspecificprimerPCR.TheOsAPx2genewasexpressedatthe mRNAlevelandtheindividualM.sativa(T#1,T#2,T#5)wereobtainedthroughassayingthegenerationofpositiveT2using RNAgelblotanalysis.Whentheseedsofthewildtype(WT)andtheT2(T#1,T#5)wereincubatedinculturecontainingMS withNaClfor7days,theresultsasshownoffollowing:therootlengthoftransgenicplantwaslongerthanWTplants,the H2O2contentinrootsofWTwasmorethanoftransgenicplants,theAPXactivityunderstressesincreasedby2.89times comparedwiththeWT,themalondialdehyde(MDA)contentoftheWTwashigherthanthetransgenicplants,theleavesof theWTturnedyellow,butthoseofthetransgenicplantsremainedgreenandremainedhealthy.Thechlorophyllcontentin theWTleaveswaslessthaninthetransgenicplants,aftersoakinginsolutionsofH2O2,sodiumsulfite(Na2SO3),andsodium bicarbonate(NaHCO3).Therefore,theOsAPx2geneoverexpressionintransgenicM.sativaimprovestheremovalofH2O2 andthesalt-resistancecomparedwi