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蛋白质研究系列 CAT#:131006-100 低温运输保存 RIPA裂解液（强） RIPA?Lysis?Buffer（S） 使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路26号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506 网址：；电话：400-6765278；电邮：order@ 产品及特点 RIPA（Radio Immunoprecipitation Assay）裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强，对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果，本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表： 产品名称 RIPA裂解液(强) RIPA裂解液(中) RIPA裂解液(弱) 有效裂解成分 1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS 1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS 1% NP-40, 0.25% deoxycholate 裂解强度 强 中 温和 对膜蛋白的提取 很好 较好 一般 对胞浆蛋白的提取 很好 很好 很好 对核蛋白的提取 很好 较好 较好 胞浆磷酸化蛋白提取 很好 很好 很好 细胞核转录因子提取 很好 很好 很好 含蛋白酶抑制剂 是 是 是 含磷酸酯酶抑制剂 是 是 是 主要用途 WB, IP WB, IP WB, IP, co-IP 成份 本产品 100 mL 使用手册 1份 自备试剂 PMSF 使用方法 对于培养细胞样品：1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为?1mM。2.?对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。对于组织样品：1. 把组织剪切成细小的碎片。2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为?1mM。3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。?裂解样品的所有步骤都需在冰上或4进行。用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，BCA蛋白浓度测定试剂盒Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。? 关联产品 RIPA裂解液（中）　(产品编号：131007) RIPA裂解液（弱）　 (产品编号：131008) BCA法蛋白定量试剂盒　(产品编号：80815) 超敏型BCA