分类号5501035学号石河子大学大学生创新创业训练计划项目课题.doc

分类号：5501035学号： 石河子大学大学生创新创业训练计划项目课题名称： 葡萄内生菌耐有机溶剂 脂肪酶产生菌的筛选与鉴定 学生姓名： 杨杰、马蕊洁、吕秋歌、唐鹏科 学 号： 2010511111、2011511228、2011511230、2011511014学 院： 食 品 学 院 专业、年级：食品科学与工程10、11级 食品质量与安全11级 指导教师： 刘 娅 职 称： 副 教 授 葡萄内生菌耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选与鉴定 石河子大学 杨杰 马蕊洁 吕秋歌 唐鹏科（石河子大学食品学院 新疆石河子市 832000）指导老师 刘娅 副教授摘要：本文主要研究从新疆酿酒葡萄内生菌中分离筛选耐有机溶剂脂肪酶的新菌株。从已分离出的73株葡萄内生菌中，采用罗丹明B平板法初筛得到7株产脂肪酶的内生菌，再以1%正庚烷、1%甲苯为筛选压力，经液体发酵培养和遗传稳定性研究，确定产耐有机溶剂脂肪酶酶活力最高的1株内生菌M-CY1。通过形态及26SrDNA-ITS分子生物学技术鉴定，确定该菌株为草酸青霉菌（Penicillium oxalicum），其产脂肪酶能力稳定，并构建了系统发育树。 关键词：葡萄内生菌、耐有机溶剂脂肪酶、筛选、鉴定、稳定性Grape endophyte-resistant organic solvents Lipase Producing Bacteria and IdentificationAbstract:: this paper mainly studies from xinjiang wine grape isolated endophytic bacteria screening of the new strain of the organic solvent resistant lipase. 73 strains isolated from the grape endophytes, at the beginning of rhodamine B plate method is used to screen for 7 strains produce lipase endophytes, 1% to 1% n-heptane, toluene as selection pressure, the liquid fermentation culture and genetic stability research, determine the organic solvent resistant lipase producing enzyme activity of the highest M - 1 endophytes CY1. Through the form and 26 srdna - ITS molecular biology identification technology, determine the strains of Penicillium oxalate (Penicillium oxalicum), the ability to produce lipase stability, and phylogenetic tree was constructed.Keywords: grape endophytes, organic solvent resistant lipase, screening, identification and stability1 前言 脂肪酶(Lipase）是分解三脂酰甘油的水解酶类，它不仅能将底物三脂酰甘油水解为丙三醇和脂肪酸，还能催化水解反应的逆反应。脂肪酶作为一种重要的生物催化剂，其潜力越来越被人们所认识，尤其是它在有机溶剂存在的情况下用于催化不对称合成反应。 然而酶在非水介质中活性降低---比其在水溶液中活性降低 4-5 个数量级，因此人们采取了一些物理和化学方法来提高酶在有机溶剂中的活性。可是如果能从自然界直接筛选到耐有机溶剂脂肪酶，那么对于催化有机合成将是十分有利的。微生物是当前工业脂肪酶的最重要来源，随着非水相酶学的不断深入，脂肪酶的应用已超出了油-水界面上进行水解反应的范围，如食品工业的油脂改性、香精香料工业的芳香酯合成、医药行业的手性化合物拆分、肽合成、生物能源行业酶法合成生物柴油等反应体系中，脂肪酶底物是水不溶性的，或者在水中不稳定，加之天然酶在有机相中