牛病毒性腹泻病毒内标双重TaqMan荧光RT-PCR方法的建立及初步应用.pdfVIP

第36 卷第8 期 中国预防兽医学报 Vol. 36 ,No.8 2014 年 8 月 Chinese Journa1 of Preventive Veterinary Medicine Aug. 2014 doi: 10.3969/j.issn.1008-0589.2014.08.15 牛病毒性腹泻病毒内标双重 TaqMan 荧光 RT-PCR 方法的 建立及初步应用 季新成 l ，史 茜\郭春娟 2 ，王科坷 l ，冉多良 2 ( 1.新疆出入境检验检疫局，新疆乌鲁木齐 830063; 2. 新疆农业大学.新疆鸟鲁木齐 830052) 摘 要: 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 内标双重 TaqMan 荧光 RT-PCR 方法，本研究根据 BVDV 5飞UTR 区序列设计引物和荧光标记探针，通过重叠延伸 PCR (SO巳PCR)扩增获得内标模板，经体外转录得到可以作为内 标物的 cRNA。 经反应条件的优化，建立了 BVDV 内标双重 TaqMan 荧光 RT-PCR 检测体系。 结果表明:当 3 cRNA 浓度为 10 拷贝 /μL 时，二者均有较好的扩增曲线;该方法对I 型 BVDV 的检测灵敏度为 0.25 TCID剑，对 II 型 BVDV 的检测灵敏度为 2.5 TCID ; 利用该方法对猪瘟病毒等其他相关核政的检测结采均为阴性;重复性检 so 测 Ct 位交异系数为 0.54~4.73 。 对 506 份临床样品检测，结采有23 份样JL为 F日性，阳性样品检出数量和编号与 不含内标的单一荧光 RT-PCR 方法完全一致，表明该方法可以用来对BVDV 进行准确、快速检测，并且可以对检 测结采进行质量监控。 关键词:牛病毒性腹泻病毒;内标;共扩增; TaqMan 荧光 RT-PCR 中圈分类号: S852.65 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2014)08-0646-05 Establishment and application of the duplex TaqMan real-time RT-PCR with internal control for bovine viral diarrhea virus detection 2 J I Xin-cheng , SHI Qian GUO Chun -juan , WANG Ke-ke , RAN Duo-liang2 (1. X同iang Exit-import 1nspection and Qurantin Bureau , Urumqi 83∞63， China; 2. Xinjiang AgricuJtural College, Urumqi 830052, China) Abstract: 1n order to estab1ish a dup1ex TaqMan real-time RT-PCR method with internal control (IC) for bovine viral diarrhea virus (BVDV) detection , specific primers and t1uorescent probes were designed according to the pub1ished