钨酸锂抑制β淀粉样蛋白分泌及神经元的保护作用研究.docVIP

　　钨酸锂抑制β淀粉样蛋白分泌及神经元的保护作用研究 作者：侯军代 路露 张晓裕 罗焕敏 【摘要】 目的 研究钨酸锂对人淀粉样前体蛋白及早老素1（M146L）细胞分泌β淀粉样蛋白（Aβ142）的影响及其对体外培养新生小鼠大脑皮层神经元的保护作用。方法 ①体外培养转染AD相关基因、可分泌Aβ142的M146L细胞，在培养液中加入低、中、高剂量（3.1、5、8 mmol/L）钨酸锂或阳性对照药，通过对M146L细胞活性及培养基中Aβ142含量的测定，研究钨酸锂对M146L细胞分泌Aβ142的影响。②体外无血清培养新生小鼠大脑皮层神经元，采用NSE免疫细胞化学染色法进行神经元鉴定；观察神经元突起生长状况，分析研究钨酸锂对大脑皮层神经元的神经保护作用。结果 ①低、中、高剂量钨酸锂对M146L均无细胞毒性；②低、中、高剂量钨酸锂可抑制M146L细胞分泌Aβ142；③原代培养的新生小鼠大脑皮层神经元，经NSE免疫细胞化学染色被染成棕褐色的细胞占绝大多数，表明所培养细胞基本为神经元；④除低浓度（0.008 mmol/L）外，终浓度分别为0.2，0.04 mmol/L的钨酸锂均能明显使突起数目和长度增加，可促进神经元的存活。结论 适量的钨酸锂可抑制M146L细胞分泌Aβ142；对新生小鼠大脑皮层神经元具有神经保护作用。 【关键词】 钨酸锂；阿尔茨海默病；M146L细胞；β淀粉样蛋白；神经保护作用 　　【Abstract】 Objective To explore the effects of lithium tungstate (LT) on the secretion of amyloid betaprotEin 142（Aβ142）of M146L and the neuropretection on neurons from cerebral cortex of neouse in vitro. Methods ① M146L cells iddle and high dose of LT or positive control drug and the cell activity and the content of Aβ142 cerebral cortex of neouse ented neurobasal, a nefree medium bination, and identified by NSE staining; MTT assay ent of neurons. Results ①Different concentrations of LT had no influence on the survival of M146L cells；② Different concentrations of LT could inhibit the secretion of Aβ142 by M146L cells；③Most of the neurons bEIng neurons; ④The results shomol/L, or 0.2 mmol/L) could increase the number and the length of neurites as ber of survival neurons. Conclusions Adequate LT could inhibit the secretion of Aβ142 by M146L cells and has a neuroprotective effect on the neurons from cerebral cortex of neouse. 　　【Key tungstate; Alzheimer′s disease; Amyloid betaprotein; M146L cells; Neuroprotective effect 　　β淀粉样蛋白（Aβ142）生成抑制剂是目前阿尔茨海默病（AD）药物研发的重要方向，这类药物大多仍处于实验研究阶段，个别进入临床研究。近年研究表明，氯化锂具有神经保护作用，可拮抗多种因素诱导的神经元凋亡，在一定程度上促进神经元发生〔1〕。Phiel等研究发现氯化锂可通过抑制GSK3α而减少Aβ分泌〔2〕。同时，有研究发现钨酸钠亦是一种GSK3抑制剂〔3〕，并且与氯化锂合用具有协同作用〔4〕。因此，作者设想将氯化锂和钨酸钠经化学方法合成钨酸锂，其作用可能更优。本实验通过钨酸锂与前几种试剂对神经元作用的对比来验证这一假说，并探寻一种更佳的Aβ142生成抑制剂。钨酸锂为本实验室首次合成，也是国内外首次探讨钨酸锂对Aβ表达的影响，具有自主知识产权（专利号