青蒿琥酯逆转K562-A02细胞对阿霉素耐药性机理的研究.docVIP

　　青蒿琥酯逆转K562/A02细胞对阿霉素耐药性机理的研究 [摘要]目的： 研究 青蒿琥酯逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性及其作用机制。 方法 ：以对阿霉素敏感的K562细胞作为对照，用MTT法观察在有或无阿霉素存在条件下青蒿琥酯对培养的K562/A02细胞干预48 h后的生长抑制情况,流式细胞仪检测100 μg#12539;ml-1青蒿琥酯作用48 h前后K562/A02细胞 P糖蛋白（Pgp）平均荧光强度（MFI）的强弱,生化方法检测100 μg#12539;ml-1青蒿琥酯作用48 h前后K562/A02细胞内谷胱甘肽（GSH）的含量。 结果：(1)在不含阿霉素情况下，青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞的IC50分别为13.80 μg#12539;ml-1和13.62 μg#12539;ml-1（P＞0.05），在阿霉素存在情况下，青蒿琥酯对K562/A02细胞抑制作用明显增加（P＜0.01）；(2)与K562细胞Pgp的表达相比,K562/A02细胞Pgp高表达,青蒿琥酯处理前后K562/A02细胞的MFI无差别（P＞0.05）；(3)青蒿琥酯处理后K562/A02细胞内GSH含量较处理前明显下降（P＜0.05）。结论：青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞具有细胞毒作用，且可逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药，其机制可能是通过干扰细胞内GSHGSHｓ转移酶系统功能的发挥，而非对Pgp表达的 影响 。 [关键词]青蒿琥酯；多药耐药；K562/A02细胞；谷胱甘肽 多药耐药(multidrug resistance,MDR)是指肿瘤细胞对一种化疗药物出现耐药的同时,对其他结构不同、作用靶位不同的化疗药物亦产生抗药性，是肿瘤化疗失败和复发的根源。 目前 寻找低毒、高效的耐药逆转剂已经成为肿瘤 治疗 研究的方向。K562/A02 细胞是经阿霉素逐步诱导、具有MDR表型的稳定细胞系。我们在研究青蒿琥酯抗肿瘤的过程中发现，K562/A02细胞同K562细胞一样均对青蒿琥酯敏感，并且青蒿琥酯的存在可逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性，其不影响K562/A02细胞Pgp的表达而显著降低K562/A02细胞内谷胱甘肽（GSH）的含量，现报道如下。 1 材料和方法 1．1 细胞系及细胞培养人红白血病细胞株K562及K562/A02细胞由东南大学临床医学院中心实验室提供。K562细胞接种于含10%小牛血清的RPMI 1640 培养液,K562/A02细胞接种于含2 μg#12539;ml-1阿霉素、10%小牛血清的RPMI 1640 培养液,置于37 ℃、5%CO2 培养箱中,2～3 d传代1 次。 1.2 主要药物及试剂青蒿琥酯（广西桂林制药二厂，批号 010901），临用前溶于5％的NaHCO3溶液中，然后用RPMI 1640培养液稀释；四氮唑蓝（MTT，Gibco公司）；二甲基亚砜（DMSO，Sigma公司）；Pgp 单抗(PEUIC2美国Coulter 公司)；GSH测定试剂盒、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。 1.3 青蒿琥酯对K562及K562/A02细胞增殖的影响取对数生长期K562及K562/A02细胞,调细胞浓度为1.0×105 ml-1 。青蒿琥酯分别用含10%小牛血清的RPMI 1640 培养液及含2 μg#12539;ml-1阿霉素、10%小牛血清的RPMI 1640 培养液稀释,作用终浓度依次为100、50、25、12.5、6.25、3.125 μg#12539;ml-1。将各浓度青蒿琥酯分别与0.1 ml培养细胞加入96 孔平底培养板中，每组样本设5个复孔。37 ℃、5%CO2 饱和湿度下培养48 h。在终止培养前4 h每孔加入MTT 20 μl(5 mg#12539;ml－1),继续培养4 h后离心10 min,弃上清液,加入DMSO 150 μl，放在平板振荡器上振荡溶解甲10 min；将培养板置ELSA酶标仪在570 nm波长处测每孔的光密度（OD）值并记录。 计算 抑制率并利用何尔恩法［1］计算半数抑制浓度（IC50）。抑制率＝（1-实验组OD／对照组OD）×100％。 1．4 青蒿琥酯对K562/A02细胞 Pgp 表达的影响无菌收集对数生长期的K562及K562/A02细胞,细胞浓度为2×106 ml-1。PBS 洗涤,PEUIC2 4 ℃避光反应30 min,PBS洗涤后重悬,流式细胞仪检测细胞Pgp平均荧光强度（MFI），设不加PEUIC2组作为自身阴性对照。K562/A02细胞经100 μg#12539;ml-1青蒿琥酯处理48 h后无菌收集，配成浓度为2×106 ml-1的细胞悬液。按上述方法测Pgp的MFI。 1．5 青