青钱柳不同外植体组织培养及褐变防止的研究.docVIP

　　青钱柳不同外植体组织培养及褐变防止的研究 作者：吴群英 徐庆 李丽亚 梁荣感 龚受基 【摘要】 　　目的探索青钱柳快速繁殖途径和褐变的防止方法。方法分别在不同季节采取青钱柳的嫩芽、带节茎段和嫩叶作为外植体，对外植体进行4种不同方式的处理后，接种到不同激素种类和激素组合的培养基中进行培养。结果春季取材更易诱导出愈伤组织和新芽；诱导茎段出芽的最佳培养基为B5+BA3.0 mg/L+NAA0.1 mg/L +IBA0.01 mg/L；适宜于嫩叶、嫩芽愈伤组织诱导的培养基分别为：B5+BA5.0 mg/L +NAA0.1 mg/L +IBA0.1 mg/L和B5+2，4－D1.0mg/L+BA0.1mg/L；外植体先于4℃低温预处理5 d和直接用烧红的手术刀快速切割外植体后再进行接种可有效减少外植体的褐变。结论青钱柳组织培养可诱导芽的产生和愈伤组织的形成。 【关键词】 青钱柳 组织培养 褐变 　　Abstract：ObjectiveTo study the rapid propagation and prevention of bro segments, and tender leaves ediums.ResultsSpring ost suitable medium for nodular stem segments to induce buds g/L +NAA0.1 mg/L +IBA0.1 mg/L;as for tender leaves , B5+BA5.0 mg/L +NAA0.1 mg/L +IBA0.1 mg/L um to induce callus, and B5+BA1.0 mg/L +NAA0.01 mg/L +IBA0.1 mg/L callus. Putting the explants under the condition of 4℃ for 5 days and cutting the explants quickly ；带节茎段约2.5 cm、叶片大小为1 cm2，以下同）后，进行消毒和接种作为对照组；②在接种的培养基中添加浓度为0.1%的活性炭；③外植体切成所需大小后于冰箱4℃低温下预处理5 d再进行接种；④将外植体用烧红的手术刀快速切割成所需大小后进行接种。 　　1.2.2 外植体的消毒和接种 　　将外植体于洗衣粉水中浸泡20 min，流水冲洗1～2 h，接种前先在75％的酒精中浸泡20～30 s，无菌水冲洗3次后根据外植体不同类型用0.1％的升汞处理6～15 min，再用无菌水冲洗4次，在无菌条件下接种到培养基上，每瓶接种1个外植体，每一处理接种30瓶。每隔25～30 d继代1次。 　　1.2.3 培养基的设计 　　B5为基本培养基，附加3％的蔗糖和0.7％的琼脂。诱导芽的培养基为：① BA1.0+NAA0.01+IBA0.1；② BA3.0+NAA0.01+IBA0.1；③BA5.0+NAA0.01+IBA0.1；诱导愈伤组织的培养基为：④2,4-D1.0+BA0.1；⑤BA3.0+NAA0.05+IBA0.1；⑥BA3.0+NAA0.1+IBA0.1；⑦BA5.0+NAA0.1+IBA0.1（单位：mg/L）。培养基灭菌前将pH值调至5.8～6.0。 　　1.2.4 培养条件 　　暗培养7 d后再转为光照培养，光照时间12 h/d，光强1 500～2 000 Lx。培养温度为（25±2）℃。 　　1.2.5 实验结果的统计和 计算 　　每一处理在接种后定期观察、记录外植体的动态和生长情况，在培养30 d分别统计接种数、褐变率、出愈数、出芽数、诱导率（注：接种数为去除污染后的数量，褐变率为褐变数与无污染的接种数的比值，诱导率为出愈数或出芽数与无污染的接种数的比值）。 　　 2 结果 　　2.1 青钱柳不同外植体与芽的诱导的关系 　　本试验将嫩芽、茎段和嫩叶分别接种于培养基中，比较不同外植体诱芽情况，（见表1）。由表1可见，青钱柳的嫩芽、嫩叶均不能够直接诱导芽的产生，带节茎段在接种约7 d时叶柄基部有腋芽萌动，14 d时可见嫩绿的单芽长约0.4 cm，30 d时芽长为0.8 cm。说明同种植物的不同部位外植体诱导芽产生的能力是不同的。 　　在植物组织培养中，植物激素对器官的分化调节起重要作用，就形态学而言6-BA能够促进芽的分化［7］。从表1可见，诱导青钱柳芽抽生的适宜6-BA浓度为3.0 mg/L，诱导率为29.17％；BA为1.0 mg/L虽然可以诱芽，但诱芽率低，为4.35％；6-BA为5.0 mg/L则不能诱导芽的抽生。说明在诱导芽的生成时6-BA的浓度是一个关键因素，浓度过低诱芽率偏低，过高则抑制芽的抽生。 表1 青钱柳不同外植体与芽的诱导的