微生物发酵中药研究进展要点.ppt

一、简介 其有效成分包括：虫草酸及虫草素、蛋白质和氨基酸、多糖及糖类衍生物、固醇类、核酸、腺苷类、脂肪酸及其它有机酸、维生素、无机元素等。 一、简介 研究及实践证明，它具有以下功能： 调节免疫系统功能 直接抗肿瘤作用 提高细胞能量、抗疲劳 调节心脏功能 调节肝脏功能 调节呼吸系统功能 调节肾脏功能 调节造血功能 调节血脂 其它 一、简介 生活史： 夏天，蝙蝠蛾产卵于花草上 卵长成小虫钻入土壤继续生长 虫草真菌的子囊孢子侵入到幼虫中 虫体死亡,只剩下空壳 夏天,菌丝生长，长成虫草 一、简介 人工培养： 人工栽培 半人工栽培 发酵生产菌丝体 二、液体深层发酵高产虫菌素工艺的优化 基本步骤： 保藏菌种 斜面培养基 种子培养基 发酵培养基 虫菌素产量测定 二、液体深层发酵高产虫菌素工艺的优化 单因素实验： 高产菌株的筛选 二、液体深层发酵高产虫菌素工艺的优化 单因素实验： 培养基对发酵液虫草素含量的影响 二、液体深层发酵高产虫菌素工艺的优化 单因素实验： 不同添加物对虫草素产量的影响 二、液体深层发酵高产虫菌素工艺的优化 单因素实验： 腺嘌呤对虫草素合成时间的影响 二、液体深层发酵高产虫菌素工艺的优化 单因素实验： 腺嘌呤不同培养方式对虫草素含量的影响 二、液体深层发酵高产虫菌素工艺的优化 实验结论： 本实验发现，发酵液虫草素含量最高的菌株是21号；最适培养基配方为：蔗糖40g/L、蛋白胨15g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、KH2PO4 0.5g/L、K2HPO4·3H2O 0.5g/L、pH自然；在此培养基中加入0.5g/L的腺嘌呤进行培养可使虫草素产量提高30%，同时腺嘌呤的添加也可以加快虫草素的合成；纯静置培养有利于虫草素的产生和积累，静置培养28d，所得发酵液中虫草素含量达2.05g/L，比优化前提高2倍。 二、液体深层发酵高产虫菌素工艺的优化 讨论： 虫草素的生物合成途径目前尚不清楚，本研究发现，向培养基中加入腺嘌呤和腺苷可明显提高虫草素的含量，因此推测虫草素生物合成途径与腺苷有一定的联系。 本实验发现静置培养虫草素含量最高，因此推测菌丝体通氧条件差，有利于虫草素的积累。 三、展望 运用深层发酵法对冬虫夏草菌丝体进行发酵生产，既加快了生产速度，又提高了冬虫夏草的产量，对于冬虫夏草的生产具有重大的意义。目前，冬虫夏草已经从名贵中药的圣坛走入大众化药品领域，我们期待随着科技的进步，冬虫夏草这一医学宝藏能为人类健康发挥更大的作用。 真菌活性多糖的制备工艺 原料有两种来源 子实体 子实体多糖 液体深层发酵法 菌丝体 菌丝体多糖 （胞内多糖） 发酵液 发酵液多糖 （胞外多糖） 一、真菌多糖深层发酵法 1．原理 2．设备 3．工艺流程 一、真菌多糖深层发酵法 4．工艺说明 （1）菌种： 菌种培育→斜面或沙土管孢子低温保藏→复壮→分离纯化 （2）培养基 ： ①孢子培养基：提供菌体的生长繁殖，形成孢子。 ②斜面/液体种子培养基：供孢子发芽、生长和繁殖菌丝体， 并使菌体长得粗壮，成为活力强的“种子”。 ③发酵培养基：供菌种生长、繁殖和合成产物 （3）种子制备（种子扩大培养） ①斜面活化：使保藏的生产菌种恢复活力 ②摇瓶培养：种龄要控制在对数期 ③种子罐扩大培养：一般不要超过三级 （4）发酵罐：通风式发酵罐 一、真菌多糖深层发酵法 5．发酵过程工艺控制 ①温度、pH控制： 最适生长温度和pH并非一定是最适产物形成温度和pH ②压力控制：正压发酵 ，保证纯种的培养 ③溶解氧控制：通过通气和搅拌实现。搅拌转速，通气量 发酵前期小、中期大、后期小。 ④泡沫控制：食用级消泡剂 如泡敌 ⑤中间补料：真菌多糖的形成一般在减速期和稳定期， 故在此时期内可连续或多次补料(一般为碳源)。 ⑥染菌控制：无菌操作 ，设备密封性能 检查，染菌检查 一、真菌多糖深层发酵法 6．发酵终点判断 何时放罐要根据发酵目的、经济等因素综合考虑 。 以菌丝形态、数量以及养分的消耗和代谢的变化作为指标。 二、真菌多糖提取纯化工艺 1．原理：热水或极性溶剂浸提 →分离纯化 →胞内外多糖产品 2．设备 3．工艺流程 4．工艺说明 二、真菌多糖提取纯化工艺