微生物发酵制药技术要点.ppt

* * 微生物发酵制药的应用 抗生素 维生素及辅酶类 其他类 蛋白质、多肽、氨基酸及核酸类 对抗细菌感染性药物的需求使发酵技术奇迹般成功。 * * * * * * * 物理参数的检测与控制 3.发酵过程的主要控制参数与检测 * 对一种微生物来说： 超过它的最高生长温度可杀死它 采用它的最适生长温度可培养它 低于它的最低生长温度可保存它 * 温度的选择原则 * 温度的控制方式 * 压力的检测与控制 * 搅拌的检测与控制 * 化学参数的检测与控制 基质浓度 pH 溶解氧 尾气 * 基质浓度的检测与控制 * pH的检测与控制 * 环境中微生物可生存的pH值范围在1～11之间， 具体到每种微生物而言： 细菌最适pH值在6.5～7.5之间。 放线菌最适pH值在7.5～8之间。 酵母菌、霉菌适合于pH5～6的酸性环境。 因为微生物在生长过程中的代谢产物可以改变环境中的pH值，所以在培养微生物时，培养基不但要调节pH值，还要选择适合pH值的缓冲。 如磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液等。 * 控制pH的策略 * 通气条件对微生物生长的影响 好氧性微生物，在培养时必须保证通 气条件良好。实验室中通常采用震荡培养 或摇瓶培养，发酵生产中多采用通入无菌 空气和搅拌等方法供氧。 厌氧性微生物，在培养时必须隔绝空 气，通常采取的措施有：用焦性没食子酸 吸收氧气、抽真空、加盖覆物以及密闭容 器等，或采用厌氧培养箱、发酵罐等。 * 溶解氧的检测与控制 标准：不影响呼吸或产物合成的最低溶解氧浓度 供氧必需大于或等于溶氧，才能使发酵正常进行 * 影响供氧的因素 增加氧分压：通入富氧空气，增加溶氧浓度， 不经济 提高罐压：增加CO2浓度，对设备要求高 改变通气速率 降低发酵温度 改变培养基粘度 中间补水 添加表面活性剂 间接策略：控制菌体浓度 * 废气检测与控制 * 泡沫的检测与控制 * 泡沫形成的原因及其影响 * 泡沫控制 培养基调整与工艺控制： 少加或缓加起沫基质； 改变发酵条件，如pH、升高温度、减少通气、 降低搅拌速率。 改变发酵工艺，如分批投料。 加入消泡剂 机械消泡 * 化学消泡 * 机械消泡 * 消泡剂的使用 * 发酵终点的判断 * 经济原则 在最大生产率时，终止发酵 发酵总生产周期最短 * 产品质量原则 * 生物、物理、化学指标 * 发酵培养的操作方式 * * * * * 培养基成分必需完全，营养丰富。 用速效性、容易利用的碳、氮源和无机盐等物质，但浓度不宜高。 种子培养基要与发酵培养基相适应，主要成分接近，不能差异太大。 缩短发酵的延滞期。 种子培养基－要求 * 概念： 提供微生物生长、目标产物生成的生产用培养基 作用：不仅要满足菌体的生长和繁殖，还要满足菌体合成目标产物，是发酵生产中最关键和最重要的培养基。 发酵培养基的要求： 营养物质浓度和粘度适中，组成上丰富完整。 不同菌种和不同产物，对培养基的要求差异很 大，组成和配方需要优化。 发酵培养基（fermentation medium) * 概念：发酵过程中添加补充的培养基。 作用：稳定工艺条件，延长发酵周期，提高目标产物产量。 组成：各种必要的营养物质，碳源、氮源、前体 制备：按单一成分配制，各自独立控制，或按一定比例制成复合补料培养基 补料培养基 * 控制发酵培养基的质量 * * * * 培养基设计一般原则 * 二、灭菌操作工艺 * 由于各种发酵过程所用的微生物菌种、培养基以及发酵的条件、产物的性质不同，染菌造成的危害程度也不同。 不管是对于哪种发酵过程，一旦发生染菌，都会由于培养基中的营养成分被消耗或代谢产物被分解，严重影响到产物的生成，使发酵产品的产量大为降低。 一）、染菌对不同发酵过程的影响 * 1）青霉素发酵过程：由于许多杂菌都能产生青霉素酶，因此不管染菌是发生在发酵前期、中期或后期，都会使青霉素迅速分解破坏，使目的产物得率降低，危害十分严重。 2）核苷或核苷酸发酵过程：由于所用的生产菌种是多种营养缺陷型微生物，其生长能力差，所需的培养基营养丰富，因此容易受到杂菌的污染，且染菌后，培养基中的营养成分迅速被消耗，严重抑制了生产菌的生长和代谢产物的生成。 * 3）柠檬酸等有机酸发酵过程：一般在产酸后发酵液的pH值比较低，杂菌生长十分困难，在发酵中、后期不太会发生染菌，主要是要预防发酵前期染菌。 4）谷氨酸发酵：周期短，生产菌繁殖快，培养基不太丰富，一般较少污染杂菌，但噬菌体污染对谷氨酸发酵的影响较大。 * 种子培养期染菌 染菌发生的不同时间对发酵的影响 种子培养主要是使微生物细胞生长与繁殖，此时，微生物菌体浓度低，培养基营养十分丰富，比较容易染菌。 若将污染的种子带入发酵罐，则危害极