利用不同的方法筛选与鉴.docVIP

利用不同的方法筛选与鉴定转化子 院系： 生命科学学院 专业：生物工程 班级：10生物工程一班 姓名： 周伟竞 学号：1014200006 摘要 本文通过蓝白斑筛选、菌落直接PCR、提质粒进行PCR、酶切鉴定的实验方法，通过α-互补筛选（蓝白斑）从转化子中筛选重组子，由于pET32-CaM5 Vector上带有lacZ基因，因此可以通过菌落直接PCR的分子鉴定，可以鉴定细菌中有没有转入外源DNA；然后再挑取单菌落进行培养、提取质粒，通过凝胶电泳观察质粒的大小；最后用限制性内切酶切割大小符合的质粒，电泳观察酶切片段的大小是否与预期的一致。 关键词 菌落直接PCR 提质粒 酶切 鉴定 前言 通过本次的一系列实验操作，目的是为了能够筛选出含有pET32-CaM5质粒的大肠杆菌DH5α，并进行鉴定该转化子。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点，若要克隆较小的DNA片段（10kb）且结构简单，则质粒是最好使用的了。因为在实际操作过程中，用重组质粒转化的大肠杆菌DH5α的量少，连接产物没有也不可能在经过分离纯化而获得纯的重组质粒，连接产物中混有载体自连而成的空载体、载体与目的片段连接而成的目的重组质粒和载体与非目的片段连接而成的非目的重组质粒。同时，宿主的转化效率极低，因此，绝大部分宿主