生化分离工程考试重点.pptVIP

生物分离过程的一般流程 1.4 生物分离的特点 分离对象的特征： 传统的生物化学工业的主要对象（如通过发酵生产的有机溶剂、氨基酸、有机酸和抗生素等）是小分子生物物质，如氨基酸、酒精、有机酸等，产品的性质相对比较稳定。 现代生物技术工业的产品（如用重组DNA技术生产的医用蛋白质和多肽等）具有生物活性，其稳定性受pH、温度、离子强度、提取过程所使用的溶剂和表面活性剂、金属离子等各方面因素的影响，有些生物产品甚至对剪切力很敏感，产品的分子量越大，其稳定性就越差，分离纯化的条件必须非常温和。一些产物组分的浓度非常低，但其产品的纯度却要求很高，含量常常要达到95％甚至98％以上。如果是医用药物还应具有正常的颜色、稳定性和溶解速率等性质。 发酵液的主要特征： 产物浓度较低（见下页表），并含有大量的水分； (2) 是一个复杂的多相体系，含有菌体、未消耗尽的固体培 养基等固体成分和大量的液相； (3) 未消耗完的培养基成分，包括各种无机盐和有机物； (4) 除所需产物外，还含有其他副产物以及色素等杂质，有些杂质的性质与产物很接近； (5) 发酵液容易被杂菌污染，产物可能被微生物或酶降解； (6) 发酵液粘度较大，浓缩时起泡现象严重； (7) 所需要的发酵产物，有的存在于发酵液中，也有的存在于细胞或菌体内。 生物产品的分离过程有以下特点： 分离的对象组成复杂，发酵液或培养液是复杂的多相体系，料液粘度大，固液密度差小，固液分离难度较大； 许多发酵产品具有生理活性，很容易变性失活，遇热、极端pH值、有机溶剂会引起失活或分解，特别是蛋白质的生物活性与一些辅因子、金属离子的存在和分子的空间构型有关。甚至剪切力也会影响空间构型和使分子降解，对蛋白质的活性有很大影响，因此，分离过程中的pH值、温度和搅拌等条件必须特别注意； 目的产物和其它代谢产物种类多，理化性质复杂，很难通过单一手段将产物分离和纯化； 发酵液中生物产品的浓度很低，而杂质含量却很高，这使分离所需能量以及产品价格大大提高，产品浓度与产品价格的关系见下页图； 许多生物产品要求达到的纯度较高，尤其是用于医疗用途的产品； 6. 微生物发酵或酶催化反应多采取分批操作，各批料液不尽相同，要求下游加工有一定的弹性，对不同批号的料液都要能处理。发酵液的放罐时间、发酵过程中加入的消泡剂对提取产物都会有影响。由于发酵产物大多是不稳定的，故快速操作往往对保证有效地回收和纯化产物非常关键。 1.7 生物分离的一般流程 ① 发酵液的预处理（Pretreatment）和固液分离 经过加热、调pH、添加絮凝剂等方法对发酵液进行预处理后，经常采用过滤和离心这两个单元操作进行固液分离。如果产品在细胞内，那么这一步中往往还包括细胞的破碎以释放产品操作，这个过程通常是在进行固液分离之后进行的，这样可以减少分离体系的体积 (相应增加产品浓度)。由于产品释放之后体系中又同时存在有固体和可溶物（产品），因此需要再增加一步固液分离以除去细胞碎片。 这个阶段的主要任务是去除（或收集）发酵液中的固相物质，为后续的几个过程提供澄清的原料液体。经过这一步操作，产物的浓度或品质一般不会有太大的改善。 ②产品分离及初步纯化（isolation） 在这一步中，需要除去与目标产物性质差异较大的杂质并对产品进行浓缩。对于不同性质产品，根据其各自的特点采用不同的方法进行分离，沉淀、吸附和萃取是这个步骤中的典型操作。这个步骤往往是由许多个单元操作组合起来的多级加工过程，经过处理，产品的浓度（或纯度）有较大变化。 ③纯化和精制（purification） 这步中所用得技术对产品的针对性（选择性）较强，能够除去与产品的物理性质或化学功能类似的一些杂质。色谱、电泳、结晶是很好的一些纯化方法，产品的品质也能得到很大的提高。 ④成品加工（polishing） 根据产品应用时的要求，在产物经过提取和精制后，一般还需要一些加工步骤。例如浓缩、无菌过滤和去热原、干燥、加入稳定剂等。 1.8 生物分离过程的选择准则 （1）产物的特性 产物是在胞内还是在胞外→是否需要细胞破碎以及选用哪种破碎方法?细胞破碎过程中产品的收率和活性的保留! 发酵液中产物浓度的高低对分离工艺选择的影响很大，如果产物浓度很低，往往需要首先进行产物的浓缩以提高后续操作的有效性； 对于分离原料的特性必须认真对待。我国许多大的生物技术产业（如酒精、柠檬酸、酶制剂等工业）以粗料发酵为主，粗原料中带入的大量