人教版教学课件土壤中分解尿素的细菌的分离和计数.ppt

* * * 专题2 微生物的培养与应用 【课题目标】 研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。 【研究对象】 土壤中能分解尿素的细菌 【达到目的】 （1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这 样的细菌 【研究思路】 （一）筛选菌株 原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 回答： 1、在该配方中，为微生物生长提供碳源和氮源的是什么物质？ 2、绝大多数的微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，请分析该培养基是否对微生物有选择作用？如果有，是如何进行选择的？ 葡萄糖、尿素 有选择作用， 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 【统计菌落数目】 常用方法：稀释涂布平板法、显微镜直接计数法， 还可以用过滤膜法 1、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法） 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表 面生长的一个菌落，来源于样品稀释 液中的一个活菌，通过统计平板上的 菌落数，就能推测出样品中大约含有 多少活菌。 ②为了保证结果的准确，一般选择菌落数在30—300的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。 计算公式： 每克样品中的菌落数=（某一稀释度下平板上生长的平均菌落数／涂布平板所用稀释液体积）×稀释倍数 ①设置重复组，目的是增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1ml接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。为是结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布培养，计算出菌落平均数 操作 2、显微镜直接计数法 （1）原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。 （2）方法：用计数板计数。计数板是特制的载玻片，其上有特定的面积为1mm2，高为0.1mm的计数室，一个计数室又被分成25个（或16个）中格，每个中格再被分成16个（或25个）小格，每个计数室都由400个小格组成。 （3）操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4~5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含的细菌数，再按计数公式求出每毫升样品中所含的细菌数。 （4）计算公式 每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数X400X10000X稀释倍数 （5）缺点：不能区分死菌与活菌。 3过滤膜法 以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。 1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？ 　　答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。 　A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。 一是由于土样不同； 二是由于培养基污染或操作失误。 （三）设置对照 究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。 　　另一种方案： 　　将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 实验方案有两种 　　　一种方案： 　　可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 * * * *