鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因研究.docVIP

　　鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因研究 作者：陈琳 蔡挺 张顺 许小敏 【摘要】 目的 了解我院鲍曼不动杆菌(Aciobacter baumannii，AB)氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因存在情况。方法 根据美国CLSI/NCCLS 2004年版要求进行抗菌药物敏感性试验，应用PCR技术对AB菌进行氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因检测。结果 AB菌对13种抗菌药物耐药严重。27株AB菌中氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)I阳性23株(85.2%)、aac(6′)I阳性18株(66.7%)、ant(3)I阳性22株(81.5%)。氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为85.2%。I类整合酶基因(intI1)阳性23株(85.2%)。结论 我院AB菌不仅具有多重耐药性，而且氨基糖苷类修饰酶基因、I类整合酶基因携带率高。 【关键词】 鲍曼不动杆菌； 多重耐药； 氨基糖苷类修饰酶； I类整合酶基因 ABSTRACT Objective To study the aminoglycosides modifying enzyme genes and intI gene in Aciobacter baumannii in Ningbo No.2 Hospital. Methods The susceptibility of 13 antibacterials inoglycosides modifying enzyme genes and intI1 gene ultidrugresistance of A.baumannii . In 27 strains of A.baumannii, the positive strains of aac(3)I inoglycosides modifying enzyme gene ultidrugresistance but also high percentage of aminoglycosides modifying enzyme gene and intI1 gene in A.baumannii isolated from the hospital. KEY ultidrugresistance; Aminoglycosides modifying enzyme; intI1 不动杆菌属细菌广泛分布于 自然 界，也可从人的各种体液、皮肤和粘膜中分离到。由于该属细菌在环境中的存活时间长，因此易于在患者之间播散并引起 医院 内感染。鲍曼不动杆菌(A.baumannii，AB)是医院感染的常见菌种之一。氨基糖苷类药物与β内酰胺类药物联合用药曾是 治疗 AB菌感染的有效药物，但近年来这二类药物耐药性逐步升高。在革兰阴性菌耐药机制中，I类整合子起着重要的作用，它可携带多种β内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因［1～5］。为了解我院AB菌氨基糖苷类修饰酶基因和I类整合子存在状况，我们对27株AB菌进行了6种氨基糖苷类修饰酶基因(aac(3)I、 aac(3)II、 aac(6′)I、 aac(6′)II、 ant(3)I、ant(2)I)和I类整合子的遗传标记——I类整合酶基因(intI1)检测，现报告如下。 1 材料与方法 1.1 菌株来源 27株AB菌分离自2005年1月～12月间宁波市第二医院住院患者临床标本，分别为：导管痰10份，痰液9份，腹腔引流液2份，伤口/创面分泌物2份，尿液1份，血液1份，尿导管口标本1份和冷凝水标本1份。全部菌株均使用法国BioMerieux公司VITEK32全自动细菌鉴定仪鉴定菌种。标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。 1.2 药敏试验 采用KB法测定13种抗菌药物的敏感性，并根据美国CLSI/NCCLS 2004年版要求进行抗菌药物敏感性判断。 1.3 细菌处理 挑纯培养菌落置入0.5ml离心管内(内预置200ng/ml蛋白酶K溶液200μl)，56℃水浴2h，改95℃水浴10min，加入Chelex100 40μl，离心(15000r/min)30s。上清液即为基因检测的模板液，-20℃冰箱保存备用。 1.4 基因检测 基因检测均采用PCR法。各种靶基因引物序列和目的产物长度见表1。PCR扩增体系均为：每反应体系P1、P2引物各0.5μmol/L，dNTPs各200mmol/L，KCl 10mmol/L，(NH4)2SO4 8mmol/L，MgCl2 2mmol/L，TrisHCl(pH9.0)10mmol/L，NP40 0.5%，BSA 0.02%(in，然后93℃ 30s→55℃ 30s→72℃ 60s，循环35周期，最后一个72℃