鲜壁虎的高效液相色谱指纹图谱的论文.docVIP

　　鲜壁虎的高效液相色谱指纹图谱的论文 作者：李耀辉, 盛继文, 邵建新， 秦骁强， 李惠， 邓淑娥 【摘要】 　　目的建立鲜壁虎的高效液相色谱指纹图谱，探讨不同壁虎间的相似程度。方法采用高效液相色谱法分析鲜壁虎提取液中相关物质的保留时间和吸收强度，对6种壁虎样品共有峰峰面积进行聚类。结果选定的色谱条件给出了较好的保留时间分布和吸收强度，建立起鲜壁虎的hplc指纹图谱，聚类分析给出了相应结果。结论该hplc指纹图谱可用于鉴定鲜壁虎，壁虎所含化学成分的多寡等因素与其品种相关。 【关键词】 鲜无蹼壁虎 指纹图谱 高效液相色谱法 聚类分析 　　abstract：objectiveto establish an hplc fingerprint of fresh gekko, and to discuss the similarity among gekkos. methodsthe retention time and absorption intensity of extracts of gekko ined by hplc,peak area of six kinds of gekko samples’mutual peaks e and absorption intensity atographic condition, the hplc fingerprint ical constituents of different gekko are related to the kinds. 　　key an公司）；ds-1高速组织捣碎机（上海标本模型厂）。色谱纯乙腈（美国tedia公司），分析纯95%乙醇。 　　1.2 药材实验所用壁虎的物种及来源见表1。壁虎均于9月从产地购买，并经当地药检所鉴定。表1 6种壁虎的种类及来源（略） 　　 2 方法和结果 　　2.1 色谱条件层析柱：购自大连江申分离 科学 技术公司（瑞士 spherigel c18填料）， 4.6 mm×250 mm，5 μm粒度。流动相：a，亚沸水；b，乙腈。梯度洗脱：0～5 min，100% a，流速0.7ml/min ；5～ 6 min流速由0.7 ml/min升至1 ml/min；6～16 min，0～10% b；16～21 min，10～40% b；21～31 min，40 ～ 60% b；31～46 min，60～100% b；46～60 min，100% b。进样量10 μl；检测波长205 nm；室温。 　　2.2 供试品的制备购买秋季捕捉的活壁虎，随机选取14～15只（约50 g），在容器内放置72 h，以消化、排空壁虎体内的食物，蒸馏水清洗晾干后准确称重，置入95％酒精致死，用捣碎机粉碎匀浆（转速：10 000/ min），50 ml 95％酒精分两次涮洗捣碎机，合并涮洗液以浸泡匀浆后的壁虎，不时摇动，浸泡24 h后抽滤；滤渣用50 ml 95％酒精再次浸泡提取，抽滤；合并两次的提取液，定容于100 ml；置-2℃冰箱内保存；使用时，取一定量的样品液经0.45 μm微孔滤膜过滤；当其温度转变为室温后，以10 μl进样分析。 潍坊干壁虎的处理：将捕捉到的潍坊活壁虎按常规方法制成干品；取15只干壁虎，用100ml 95％酒精浸泡1 d（软化），用捣碎机粉碎匀浆（转速：10000 r·min-1），用原酒精液继续浸泡2 d，提取，抽滤；滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，以10μl进样分析。 　　2.3 方法学考察 　　2.3.1 检测波长的确定由于业界对壁虎所含的有效药物成分尚无系统的研究和分析，其有效药物成分组成和结构尚不得而知，为了使壁虎乙醇提取液中所含有的物质能在紫外光检测波长下被最大限度地检出，宜选择短波长进行检测。在选用205，210，215，220 nm进行色谱分析后，对比所得色谱图发现：除色谱吸收的强度随波长增大而依次降低外，吸收峰的数量多寡无明显改变，据此而确定205 nm为色谱参数，用于色谱检测。 　　2.3.2 流动相及柱温的确定实验表明使用空调控制室温，在22～26℃的温度条件下，色谱峰的保留时间没有明显的变化，经5次在该温度范围内的测试，结果显示色谱峰的保留时间、峰高、峰面积数据的rsd均小于1.2%，在室温条件下的测试结果是可靠的。经采用不同的流动相梯度洗脱，方法中所述的梯度是最佳方案，尤其是方法开始的最初5 min以0.7 ml/min的流速进行洗脱可使保留时间较短（3～8 min）的物质得到较好的分离，满足测试的需要。 　　2.3.3 稳定性考察取鲜无蹼壁虎的乙醇溶液测试品分别在0，6，12，24，36，48 h不同时间进行测试，考察色谱峰保留时间与吸收强度的一致性，如图1中所标示的各指