第32章RNA的生物合.ppt

第32章RNA的生物合成与加工 DNA指导的RNA合成 RNA的转录后加工 RNA指导的RNA合成 （一）DNA指导的RNA聚合酶 1、DNA指导的RNA聚合酶催化RNA合成的特点： （1）不需引物. （2）原料：NTP （3）合成方向：5/→3/端 （4）模板：模板是DNA,在体内只能以DNA一条链为模板转录，叫不对称转录，转录的链叫模板链(有意义链或负链),另一链叫编码链(反意义链或正链) （5）促进因子:Mg2+能促进聚合反应. （6）无3/→5/外切酶活性，也无5/→3/外切酶的活性，过去认为RNA聚合酶无校对功能，现在认为有校正功能，只是校正功能有限. 2、大肠杆菌RNA聚合酶全酶的组成：由5个（有的书上是6个）亚基组成，分别是α、α、β、β/、σ和ω组成， σ叫起始亚基，功能是辨认起始位点，又叫起始亚基；2α和β β/组成核心酶，核心酶没有启动功能，它的功能是在已开始合成的链上移动，边移动边解开双链，边按5/→3/方向延长核苷酸链， ω亚基相对分子质量较小，功能不清楚。 酶的活性中心内有Zn2+.原核细胞中只有一种RNA聚合酶 （二）转录单位、启动子和转录因子 1、转录单位：起始于DNA模板的一个特定位点，在另一位点终止(终止子)，此转录区域称为一个转录单位。 2、启动子：是能被RNA聚合酶的σ-亚基识别并结合以开始转录的一段DNA序列。利用足迹法和DNA测序法能确定启动子的核心脱氧核苷酸序列 3、转录因子：RNA聚合酶起始转录需要的辅助因子，辅助因子的作用或是识别DNA的顺式作用元件，或是识别其它因子，或是识别RNA聚合酶。 4、启动子的共有序列： 共有序列可以不连续，从起点上游约-10序列处找到共有序列TATAAT，含6bp，叫Pribnow框（box框）或称为-10序列，实际位置在不同启动子中略有不同；在box框中各碱基出现的频率为T80A95T45A60A50T96，该序列含有A-T碱基较多，容易解开双螺旋。 在起点上游约-35序列处也有一共有序列T82T84G78A65C54A45。 （三）原核细胞的转录过程 模板识别与转录起始 链延长： 链终止： 不依赖于ρ因子的终止；依赖与ρ因子的终止 2、真核细胞的mRNA为单顺反子,因为真核细胞功能相关的基因不连在一起形成操纵子,不产生多顺反子.原核细胞的mRNA结构简单,由于功能相近的基因连在一起形成操纵子一块转录,产生多顺反子. 3、原核生物的mRNA除少数外，一般不进行加工，转录和翻译可同时进行。但rRNA和tRNA需经过加工才能形成活性RNA；真核生物的mRNA、rRNA和tRNA都需要加工 （一）真核生物mRNA前体的一般加工： 1、真核细胞mRNA的原初转录产物是分子量极大的前体,在核内加工过程中形成大小不等的中间物,称为核内不均一RNA(hnRNA),有一小部分经进一步加工成为成熟的mRNA． 2、把hnRNA加工为成熟mRNA的过程包括： （1）５/-端形成帽子(保护mRNA不被5/-核酸外切酶降解) （2）3/-端形成多聚腺苷酸的尾巴,尾巴不能阻止3/-核酸外切酶的降解作用,尾巴越长,3/-核酸外切酶作用的时间越长,mRNA的寿命越长. （3）剪去内含子转录的mRNA片段,把外显子转录的mRNA连接起来. （4）链内部核苷被甲基化 （1）5/-加帽 真核生物mRNA5/-端都有帽子，在hnRNA分子中就有帽子结构，在hnRNA分子的5/-端为三磷酸嘌呤核苷；转录起始后不久在RNA三磷酸酯酶的催化下从5/-端脱去一个磷酸，然后在mRNA鸟苷酰转移酶催化下，与GTP反应生成5/,5/-三磷酸相连的键，并释放出焦磷酸；最后在甲基转移酶催化下，以S-腺苷甲硫氨酸（SAM）提供甲基进行甲基化，产生帽子结构 5/-帽子的功能：确切功能不十分清楚，推测它可能在翻译过程中被识别和对mRNA起稳定作用。 （2）真核细胞mRNA3/-加尾 真核细胞mRNA的3/-端通常都有20~200个腺苷酸残基构成的多聚腺苷酸的尾巴结构，核内的hnRNA3/-端也有多聚腺苷酸形成的尾巴，hnRNA的尾巴比mRNA的尾巴略长，平均为150~200个腺苷酸残基。 病毒的mRNA3/-端也有多聚腺苷酸尾巴。 真核细胞和病毒的mRNA的3/端存在加尾信号AAUAAA （3）剪去内含子，连接外显子 真核生物的基因是断裂基因，但也有少数编码蛋白质的基因及tRNA和rRNA基因是连续的。断裂基因的外显子和内含子一起转录，转录产物经过剪接除去内含子部分，将外显子链接起来。 内含子有多种多样的结构，剪接机制也多种多样。剪接机制共有4种方式： 类型Ⅰ自我剪接 类型Ⅱ也是自我剪接 核mRNA剪接体剪接 核tRNA的酶