第7章_ 核酸降解与.ppt

第7章 核酸降解 和核苷酸代谢 核酸酶——水解核酸的酶 核酸酶——水解核酸的酶 第一节 核酸的酶促降解 一、外切核酸酶 二、内切核酸酶 三 、限制性内切酶 (一) 限制性内切酶类型 （二）常用的DNA限制性内切酶的专一性 转基因技术 甲基化酶 这种酶能使细菌自身DNA中的核苷酸甲基化而不被限制酶降解。可降解外来DNA分子。（保护作用） 第二节 核苷酸的分解代谢 （一）胞嘧啶和尿嘧啶的降解： （二）胸腺嘧啶的降解： 第三节 核苷酸的合成代谢 核苷酸合成的2条途径： 1、从头合成途径： 利用磷酸核糖、氨基酸、一碳单位、二氧化碳等简单化合物为原料，经一系列酶促反应合成核苷酸的过程。主要的合成途径。 一、嘌呤核苷酸的合成： （一）嘌呤核苷酸的从头合成途径 1.嘌呤环各组成成分的来源 同位素实验证明 原料：天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、一碳单位（甲酸盐）、CO2、PRPP 嘌呤核苷酸的从头合成 2. 过程：两个阶段 第一阶段：次黄嘌呤核苷酸(IMP)的合成 第二阶段：腺嘌呤核苷酸(AMP)与鸟嘌呤 核苷酸(GMP)的生成 5-磷酸核糖+ATP PRPP+AMP IMP 次黄嘌呤核苷酸 AMP与GMP的生成 （二）补救合成途径（salvage pathway） 概念：细胞利用现成的嘌呤碱基或嘌呤核苷重新合成嘌呤核苷酸的过程，称为补救合成途径。 二、嘧啶核苷酸的合成 （一）从头合成 先合成嘧啶环，再由嘧啶和PRPP合成嘧啶核苷酸。 先合成UMP，再进一步转变为胞嘧啶核苷酸和胸腺嘧啶核苷酸。 1、从头合成的过程： （1）UMP的合成： UMP合成原料：谷氨酰胺、CO2、（谷氨酰胺+CO2→氨基甲酰磷酸）、天冬氨酸、PRPP。 合成过程： Gln+HCO3－ H2N-CO-O-HPO3-+Glu （2）UTP、CTP的合成： UMP UDP UTP UTP+Gln+ATP CTP+Glu+ADP+Pi （二）嘧啶核苷酸的补救合成 三、脱氧核糖核苷酸的生成： 脱氧核糖核苷酸（包括嘌呤脱氧核苷酸和嘧啶脱氧核苷酸）是在二磷酸核苷（NDP）水平还原生成的。 核酸的酶促降解和核苷酸的代谢 尿苷酸激酶 尿苷酸激酶 ATP ATP ADP ADP CTP合成酶 C CH CH N NH2 N O C R-5-PPP 尿嘧啶核苷 UMP 尿苷激酶 ATP ADP dNDP NDP * * 核酸的酶促降解 核苷酸的分解代谢 核苷酸的生物合成 核酸酶 核糖核酸酶 脱氧核糖核酸酶 按作用底物（DNA或RNA）分类 核酸酶 核酸内切酶 核酸外切酶 按作用方式分类：水解分子内磷酸二酯键或水解分子外磷酸二酯键 一、核酸外切酶 二、核酸内切酶 三、限制性内切酶 牛脾磷酸二酯酶 （5′端外切5得3） 蛇毒磷酸二酯酶 （3′端外切3得5） 5′ p p p OH B p p p p 3′ B B B B B B B OH 外切酶：如蛇毒磷酸二酯酶和牛脾磷酸二酯酶，蛇毒磷酸二酯酶从多核苷酸链的3′端开始逐个水解核苷酸链，产物为5′-核苷酸。牛脾磷酸二酯酶从多核苷酸链的5′端开始逐个水解核苷酸链，产物为3′-核苷酸 G A 5′ p p p p OH Py Pu Py Py 1′ p p p G A C U p p p 3′ RNAase I RNAase T1 Pu ：嘌呤 Py：嘧啶 如牛胰核糖核酸酶作用于嘧啶核苷酸的磷酸二酯键， 生成3-p-嘧啶核苷或末端为3-p-嘧啶核苷的寡核苷酸。 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基对所组成的特异的回文序列，并在此序列的某位点水解DNA的酶，这类酶称为限制性内切