游离脂肪酸freefattyacidFFA.PDFVIP

free fatty acid FFA 游离脂肪酸 含测定试剂盒说明书 测定意义 FFA 既是脂肪水解的产物又是脂肪合成的物血清中FFA 的浓度脂类代谢糖代谢 内分泌能有关 测定原理 FFA 以和碱性铜蓝结合成铜皂在有机溶剂铜皂和1,5-苯卡巴肼形成樱红色溶液 在550nm 处有特征吸收峰在一定范围内游离脂肪酸含显色程度呈线性关系 自备仪器和用品 研钵冰式离心机见分光光度1mL 玻璃比色皿调式移液枪正庚烷无 95% 和蒸馏水 水甲醇氯仿 氯甲烷无水乙醇乙醚 乙醇 试剂组成和配制 试剂一 V 95% V = 2:1 自备按照乙醚 乙醇 的比例配置 试剂自备实验前1 d取200 mL 空瓶按照正庚烷氯仿无水甲醇=49:49:2 的比 例配制盖紧后混匀室温保存 试剂临用前按液体一液体液体=2:1:17 的比例配制 试剂四粉剂×2 瓶临用前用6ml 无水乙醇充分溶解待溶解后入120μL 液体四 充分混匀 标准品粉剂×1 瓶临用前配制向标准品中氯仿 10ml 充分溶解即为500 μmol/L 的 标准溶液 样品中FFA 提取 1血液中FFA 测定将所取血液室温静置1 h 后于4 ℃ 离心机3 500 rpm 离心15min 取层血清置于-20℃冰箱保存待测 2 组中FFA 含测定组用生理盐水冲洗干净后用吸水纸吸取表面水分按照组 质g 提取液体(mL)为 15~10 的比例建议取约0.1g 组入1mL 试剂 一进行冰浴匀浆转移至离心管体补足1mL8000rpm4 ℃离心10min取清 液待测 4 3 菌真菌按照胞数10 个提取液体mL 为500~10001 的比例建 议500 万胞入1mL 试剂一入提取液冰浴超声波破碎胞率300w超声 2 间隔3 总时间3min 转移至离心管体补足1mL然后8000rpm4 ℃ 离心10min取清置于冰待测 测定 1. 分光光度预热30 min 以调节波长到550 nm 2. 空白管取5mLE 管入50 µL 蒸馏水2500µL 试剂振荡混匀2min 4000rpm 离心10min取层溶液2ml 入800 µL 试剂振荡混匀2min 4000rpm 离心10min 取层溶液1ml 再入200µL 试剂四盖紧后充分震荡混匀室温静置15min于550nm 处调零 3. 标准管取5mLE 管入50 µL 标准液2500µL 试剂振荡混匀2min 4000rpm 离心10min取层溶液2ml入800 µL 试剂振荡混匀2min 4000rpm 离心10min 取层溶液1ml 再入200µL 试剂四盖紧后充分震荡混匀室温静置15min于550nm 处测定光吸收值记为A 标准管 4. 测定管取5mLE 管入50 µL 清液2500µL 试剂振荡混匀2min 4000rpm 离心10min取层溶液2ml入800 µL 试剂振荡混匀2min 4000rpm 离心10min 取层溶液1ml 再入200µL 试剂四盖紧后充分震荡混匀室温静置15min于550nm 处测定光吸收值记为A 测定管 FFA 含算 1. 血液中FFA 含算 FFA µ mol/L=C 标准液×A 测定管÷A 标准管×1 L=500×A 测定管÷A 标准管 C 标准液500µmol/L1 L指升样品 2. 组中FFA 含算 1按样本蛋白浓度算 FFA µ mol/mg prot=C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷Cpr=0.5×A 测定管÷A 标准管÷Cpr 2 按样本质算 FFA µ mol/g mass =C 标准液×A 测定管÷A 标准管×V 样总÷W=0.5×A 测定管÷A 标准管÷W 3. 按胞数算 FFA