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- 2017-05-14 发布于湖北
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资料一:核酸分
RNA抽提注意事项 RNA酶非常稳定,抽提时需防止RNA酶污染! 尽可能无RNA酶环境操作,最好有专门场所 耗材的处理: 电泳槽:0.5 M NaOH处理后DEPC水清洗 试管:氯仿浸泡处理后DEPC水清洗 枪头和eppendorf管:DEPC水浸泡后灭菌处理 实验者本身防护:一次性手套,口罩等 启盖前震荡离心管有助于防止气溶胶形成 正确的操作方式 RNA抽提常见问题分析(一) Q1、过柱抽提时柱子堵塞 裂解或匀浆出来不彻底:较少样品用量或增加裂解液用量,增加匀浆和裂解时间 Q2、得率低 A、裂解或匀浆出来不彻底:较少样品用量或增加裂解液用量,增加匀浆和裂解时间 B、RNA收集不完全:过柱法:RNA未完全洗脱,加入洗脱液后放置几分钟再离心 溶液法:65度加热促进RNA沉淀溶解 C、未除尽细胞培养液:收集细胞时需尽量除去培养液 D、使用RNAstore保存的细胞:未有效离心,加大离心力(3000g)除去RNAlater Q3、DNA污染 匀浆时,样本太多,而抽提液使用量太小 Q4、蛋白、多糖污染 RNA沉淀时,加入部分盐溶液,选择性沉淀RNA RNA抽提常见问题分析(二) Q5、
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