3 蛋白质与氨基酸. 第三章要点.ppt

二、蛋白质功能的多样性 ①酶的作用 ②运载作用 ③储存营养素 ④收缩或运动作用。 ⑤结构材料。 ⑥防御功能。 ⑦调节功能。 ⑧缓冲作用。 三、蛋白质构象和蛋白质结构的组织层次 构型：是指具有相同结构式的立体异构体中取代基团在空间的相对取向，不同的构型如果没有共价键的破裂是不能互变的。 构象：是指具有相同结构式和相同构型的分子在空间里可能的多种形态，构象形态间的改变不涉及共价键的破裂。 组织层次： 一级结构：多肽链的氨基酸序列。 二级结构：指多肽链借助氢键排列成自己特有的α－螺旋和β－折叠股片段。 三级结构：是指多肽链借助各种非共价键（或非共价力）弯曲、折叠成具有特定走向的紧密球状构象。 四级结构：是指寡聚蛋白质中各亚基之间在空间上的相互关系和结合方式。 酸水解：H2SO4或 HCl进行水解。不引起消旋作用，得到L－氨基酸。色氨酸完全被破坏，羟基氨基酸有一小部分被分解，酰胺基被水解。 碱水解：NaOH水解。多数氨基酸被不同程度的破坏，产生消旋。精氨酸脱氨，生成鸟氨酸和尿素。色氨酸在碱性条件下稳定。 酶水解：不产生消旋，也不破坏氨基酸。但往往水解不彻底，部分水解。胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）、以及胃蛋白酶。 共振结果： 限制绕肽键的自由旋转 酰胺平面（肽平面） C-N具有40％的双键性质，绕键能障高 肽键具有永久偶极性质 反式构型 蛋白质测序的策略： 测定蛋白质分子中多肽链的数目 拆分蛋白质分子的多肽链 断开多肽链内的二硫桥 分析每以条多肽链的氨基酸组成 鉴定多肽链的N—末端和C—末端残基 裂解多肽链成较小的片段 测定各肽段的氨基酸序列 重建完整多肽链的一级结构 确定半胱氨酸残基间形成的S—S交联桥的位置 羟胺裂解法： 专一性地水解Asn－Gly之间的肽键，但专一性不强， Asn－Leu， Asn－Ala也能部分裂解。 3．多肽抗菌素 4．多肽激素 5．神经肽 甲硫氨酸脑啡肽 Tyr–Gly–Gly–phe- Met 亮氨酸脑啡肽 Tyr-Gly-Gly-phe-Leu 功能：镇痛 如脑啡肽 (enkephalin) α－鹅膏蕈碱 第四节 蛋白质一级结构及一级结构分析 当多肽的分子量大到足够具有一定的空间结构时就称为蛋白质。 蛋白质与多肽的主要差别：分子量，空间结构 （一）蛋白质的一级结构（primary structure） 1．定义： 蛋白质的一级结构是指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序（sequence），一级结构的主要连接键是肽键。 2．蛋白质一级结构的测定 概况 : 序列测定前的准备工作： 样品的纯度 相对分子质量 肽链的数目 氨基酸组成 一级结构的测定主要用小片段重叠的原理 序列测定方法 （1）末端分析：包括N端分析，C端分析 N端分析方法 ① 二硝基氟苯法（DNP法、DNFB法或FDNB法） ② 丹磺酰氯法（DNS法） ③ 苯异硫氰酸(酯)法（PITC法、PTC法、PTH法、Edman降解法 ） ④ 氨肽酶（aminopeptidase, Apase）法 Ala Val Gly 亮氨酸氨肽酶（Leucine amino peptidase, LAP） 专一性: A=非极性氨基酸时 快 A=其它氨基酸时 慢 A B N端 A=Leu时 最快 4．侧链R基参加的反应 （1）-S-S-和-SH的氧化还原反应 R-SH：HS-CH2CH2OH 巯基乙醇（mercaptoethanol） HS-CH2COOH 巯基乙酸（mercaptoacetic acid） HS-CH2(CHOH)2-CH2SH二硫苏糖醇（dithiothreitol, DTT） 半胱氨酸的-SH很活泼，很容易在空气中重新氧化形成二硫键，一般可用卤代化物对-SH进行保护。 （2）苯环的黄色反应 phe+少量浓H2SO4+浓HNO3 黄色 Tyr or Trp + 浓HNO3 黄色 （3）酚基的Millon反应（米伦氏反应） HgNO3 Tyr+ Hg(NO3)2 白色沉淀后变红，鉴定酚基 HNO3 （4）pauly反应 His + 重氮苯磺酸 红色（棕红色） Tyr + 重氮苯磺酸 橘黄色 （5）Folin一酚反应 + 磷钼酸 Tyr 磷钨酸 or Phe 蓝色（钼蓝与钨蓝混合物） 氨基酸化学性质总结（重点） 1.亚硝酸反应 2.酰化反应：（苄氧酰氯、丹磺酰氯－二甲基氨基萘磺酰氯反应（DNS—Cl） ） 3.烃基化反应 2，4—二硝基氟苯反应（DNFB） 、苯异硫氰酸