分子诊断技术在结核病诊治中的应用.pptVIP

Thank You! * * I would like to cover the following areas today A brief introduction to the Company Background to tuberculosis infection and current testing The science behind how the T-SPOT.TB test works including a comparison of the test with the tuberculin skin test How OI controls product design and manufacturing through its Quality Management System And finally a summary of the information presented 这里从反应条件、扩增产物和检测方法这几个方面对比了当前主流的核酸扩增技术。 其中只有PCR是热循环的，其他都是恒温条件。 扩增产物上，PCR、LAMP、SDA都是DNA，NASBA、TMA、SAT的扩增产物为RNA。 从检测方法上，只有TMA是终点法，其他都是实时检测 * * * * * SAT的第三个特点是利于用药监测和判愈。由于SAT检测的是病原体的RNA。 有效用药之后，病原体死亡，RNA在2-3天内就会降解，因此SAT是活菌检测技术，其检测结果可用作用药监测和判愈。 对于医院而言，可提高其整体的诊疗水平，对病人而言，则避免了反复就诊，可降低诊治成本。 而胶体金，其灵敏度过低，结果不能用作药效监测的依据。 PCR检测的是DNA，有效用药之后，病原体虽然死亡，DNA的降解需要至少3周，因此PCR的结果也不能作为药效监测的依据。 所以可以说SAT填补了病原体检测方法在用药监测和判愈这一块的空缺。 先讲SAT，再讲其他 SAT的第三个特点是利于用药监测和判愈。由于SAT检测的是病原体的RNA。 有效用药之后，病原体死亡，RNA在2-3天内就会降解，因此SAT是活菌检测技术，其检测结果可用作用药监测和判愈。 对于医院而言，可提高其整体的诊疗水平，对病人而言，则避免了反复就诊，可降低诊治成本。 而胶体金，其灵敏度过低，结果不能用作药效监测的依据。 PCR检测的是DNA，有效用药之后，病原体虽然死亡，DNA的降解需要至少3周，因此PCR的结果也不能作为药效监测的依据。 所以可以说SAT填补了病原体检测方法在用药监测和判愈这一块的空缺。 先讲SAT，再讲其他 MTD结核分枝杆菌检测技术特点 采用分子技术快速鉴定（2.5小时）结核分枝杆菌复合群 标本可以是涂片阴性或者阳性的痰标本；也可以是培养物 唯一获得FDA推荐的凃阴样本快速检测技术 检测RNA，RNA只能来源于活的细菌，可鉴定活动性结核病人） 采用TMA恒温扩增，不使用PCR仪器，无需专业的PCR实验室认证 HPA杂交保护分析技术：灵敏、特异 严格的实验室防污染技术：整个实验过程所有试剂和样本全部在同一个反应管内进行，杜绝交叉污染 MTD结核分枝杆菌的直接检测意义 TB与其他分枝杆菌区分 AIDS患者鸟分枝杆菌小肠黏膜感染 龟分枝杆菌引起严重院内感染（南方某医院） 提高TB检出率 CSF、胸腹水等 疑似患者 长期低热、ESR持续增快，排除肿瘤和免疫性疾病患者，做血、痰TB菌MTD检测 DNA作为临床分子诊断靶标 四、MTBDRplus-鉴定MDR 方法名称： 耐多药结核病(MDR-TB)快速诊断为Hain Lifescience公司专利 原理： 采用线性探针技术（Line-Probe或称DNA-Strip）检测结核分枝杆菌复合群利福平(rpoB)和异烟肼(katG和inhA)等结核治疗药物的耐药基因来判断TB体内耐药性 MTBDRplus: 6h报告结核分枝杆菌复合群鉴定与耐药结果 抗结核药物 靶基因 编码的产物 靶区域和突变率 最常见突变位点 耐药水平 RFP rpoB RNA聚合酶β亚单位 RRDR 81 bp，95％ Codon531，30-75％ 高 INH katG 过氧化氢酶-过氧化物酶 整个基因，60-95％ S315T，60-95％ 高 INH inhA 烯酰基还原酶 调节区，25％ inhA-15 低 INH ahpC-Promoter 过氧化物酶 启动区，12% 低 PZA pncA 吡嗪酰胺酶 整个基因，68-97％ 无特定位点 高 EMB embB 阿拉伯糖基转移酶 ERDR少数密码子， 47-94％ Codon306，47-89％ 高 SM rpsL 核糖体蛋白S12