第六章：目的基因筛选与DNA文库构建详解.pptVIP

例如 将基因组DNA用多种限制性内切酶切割， 通过Southern杂交 则 将SpeI切割的基因组DNA中的~8.3kb片段回收，用于构建DNA文库 发现目标基因在8.3kb SpeI片段上 哺乳动物 3×109kb 若p=99% 平均20kb n=690773.2 E.coli 4639221bp p=99% 平均10kb n=2134 若用占 总DNA 1/10 区域的限制性片段, 则 n = 69075 若用占 总DNA 1/10 区域的限制性片段(10kb)， 则 n = 199 一、cDNA克隆用的mRNA 第二节 cDNA文库的构建 1. mRNA的完整性 指导合成高分子量蛋白质的能力 无细胞翻译体系（源于网织红细胞） 哺乳动物总mRNA可编码 ?10～?100kDa蛋白 指导合成目的多肽的能力 利用免疫沉淀和SDSmRNA的大小 500bp～8kb 大部分 1.5～2kb 总mRNA制剂指导合成cDNA第一链长分子的能力 合成的cDNA也应为上述范围 脱氧胸苷酸12-18聚体[oligo(dT) 12-18] 引物可刺激cDNA第一链的放射性活度掺入量至少增