抗原修复方法与注意事项.docVIP

柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法(强烈推荐) 1.适用范围：适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果优于微波修复法和直接煮沸修复法,使得免疫组化结果更加可靠 2.仪器设备：市售不锈钢家用压力锅，大小尺寸可根据需要而定(内径18cm为好)；1000-1500W电炉一台；不锈钢或耐高温塑料切片架。 3.所需试剂：0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0±0.1 4.操作步骤： (1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。 (2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液(800-1500ml)于压力锅中，大火加热直至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷汽，从喷汽开始计时，1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温(稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却)，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分钟(2×3)。 (3)按有关试剂盒的操作步骤执行。 5.注意事项： (1)加热时间长短的控制很重要，从组织切片放入缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5-8分钟为好，时间过长可能会使染色背景加深。 (2)必须使用不锈钢或耐高温塑料切片架，不能使用铜架，以防缓冲液pH值增高而导致掉片。 (3)高压锅离开火源后必须等缓冲液冷切后，才能把切片取出。 (4)为防止组织脱落，玻片必须经清洁处理后，涂覆Poly-L-Lysine( (5)缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。 EDTA 抗原热修复法 1. 适用范围：适用于部分中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复。 2. 仪器设备：电磁炉、不锈钢锅和耐高温塑料染色架。 3. 所需试剂：EDTA抗原修复液，pH9 .0 4. 操作步骤： (1)抗原修复液的配制：根据所需工作液的量，取迈新公司产品MVS-0098适量，按1:50 的比例稀释。 (2)取500ml 抗原修复工作液于1000ml 不锈钢锅中，直接在电磁炉上加热至沸腾后，调低电磁炉功率使锅内修复液保持微沸状态。将组织切片置于耐高温染色架上，再将染色架缓慢放入不锈钢锅中(注意：若快速将染色架丢进缓冲液中，往往会导致瞬时的激烈沸腾现象而造成组织脱落)，之后加盖继续加热20 分钟。再将不锈钢锅从电磁炉上移开，室温下自然冷却至室温后取出切片，蒸馏水洗1 次3 分钟，PBS 洗2 次、每次3 分钟。之后进行免疫组化染色。 5. 注意事项： (1)由于修复液蒸发量无法估计，所以修复液不能重复使用。 (2)工作液的量必须保证切片始终能浸泡在液体内。 (3)为了防止加热过程组织脱片，须采用 Poly-L-Lysine处理载玻片。 (4)抗原修复后一定要等工作液冷却后，才能将切片从工作液中取出。 柠檬酸缓冲液微波抗原修复法 1.适用范围：适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果比高温高压修复差但比直接水煮好。 2.仪器设备：微波炉(700-800w)。 3.所需试剂：0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0±0.1 4.操作步骤： (1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。 (2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液(缓冲液量不得500ml)于微波盒中，微波加热直 至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲 液中，中高档或中档继续微波处理15-20分钟；取出微波盒冷却至室温，从缓冲液 中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分 钟(2×3)。 (3)按有关试剂盒的操作步骤执行。 5.注意事项： (1)微波时间长短的控制很重要，从组织切片放入沸腾的缓冲液到微波结束的总时间 控制在15-20分钟为好。 (2)必须使用耐高温塑料切片架，不能使用不锈钢或铜架。 (3)微波过程中，如果缓冲液蒸发而量减少，无法浸泡到组织片，应该适当加上一些蒸馏水，以保证组织片都能浸泡在缓冲液中，继续微波。 (4)微波结束后必须等缓冲液冷却后，才能把切片取出。 (5)为防止组织脱落，玻片必须经清洁处理后，涂覆Poly-L-Lysine( Devil缓冲液的量(500ml)，必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。 柠檬酸缓冲液煮沸抗原修复法 1.适用范围：适合于中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果比高压修复法差。 2.仪器设备：电炉(600W)、烧杯(1000ml)等。 3.所需试剂：0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0±0.1)。 4.操作步骤： (1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。 (2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲