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体内药物分析 Contents 芳酸及其酯类药物体内分析 本章小结 本章 习题 主要内容 体内药物分析概述 体内药物分析概述 体内药物分析的对象和任务 体内药物分析的种类和储存 生物样品测定前的处理方法 体内药物分析方法 分析方法的设计与评价 Title 水杨酸（血清中） 丙磺舒（尿中） 布洛芬（血浆中） 芳酸及其酯类药物体内分析 血液 尿液 体内药物分析的对象 唾液 分离测定体内各种体液、组织、 器官和排出物中药物及其代谢物 研究、开发新测定方法 进行分析质量管理，提高测定技术和效率 进行方法学研究 体内药物分析的任务 储存: 冷藏 冰冻 防腐剂 酪酶抑制剂 A B C 血样 唾 液 A. 全血、血浆、血清 B. 药物剂量回收、肾消除率、 生物利用度等 C. 与血浆药物浓度相关 体内分析样品的种类与储存 尿样 加入可与水混溶的有机溶剂及中性盐 加入酸性沉淀剂 组织的酶消化法 蛋白质的处理 药物及其代谢物的萃取 待测组分的浓集 待测组分的衍生化 酰化 烷基化 芳香化 酯化 硅烷化 液液萃取 固相萃取 少量萃取液 挥去溶剂 生物样品测定前的处理方法 光谱分析法 色谱法 毛细管电泳法 免疫分析法 同位素法 体内药物分析方法 纯品 空白样品 回收率 体内实际样品 建立步骤 1 以水代替空白样品添加标准品测定 2 以空白样品添加标准品测定 体内分析方法设计 体内药物分析方法的评价 准确性 精密度 方法专属性 稳定性 灵敏度 线性范围 方法相关性 RP—HPLC法测定人血清中水杨酸的浓度 色谱柱：HYPERSIL ODS(200 mm×4．6 mm， 5μl)； 流动相：甲醇：1％乙酸(45：55)； 流速：0．9 ml／min；检测波长：299 nm； 灵敏度：0．005 AUFS； 柱温：35℃。进样量20μl。 取血清样品0.5ml，置于1．5 ml具塞离心管中。加入 0．8 ml高氯酸(6％)，涡旋振荡l min，于10 000 r／min 离心10 min，取上清液20μl进样，蜂面积外标法定量计算。 以水杨酸对照品的峰面积(Y)对相应的浓度(C)进行线形回 归，得标准回归曲线方程Y=0．05741+4．838X，r=0．9999(n=5)，线性范围为0．51～32．64μg/ml。 最低检测限为0.1μg/ml(S／N=3)。 见表 精密度考察 见表 尿中丙磺舒的固相萃取净化-HPLC (运动员违禁药物) 色谱柱为LiChrospher100RP(125mm×4mm, 5μm) 检测波长为254nm 流动相为25%乙腈溶液-醋酸缓冲溶液梯度洗脱 内标物为依他尼酸 色谱条件 尿样品预处理 C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后用0.5ml蒸馏水活化。 2.0ml尿样 + 内标300μl(10μg/ml)，上柱，1.0ml水洗脱生物杂质，再用甲醇0.5ml洗脱保留在柱上的丙磺舒和内标。洗脱液0.45μm浸滤膜滤过，取5μl直接进样分析。 尿中丙磺舒的固相萃取净化-HPLC ）血浆样品制备 标准样品制备 线性关系、灵敏度 Nucleosil C8柱， 4.6×200mm，5μm。 检测波长214nm。 流动相：甲醇-水-0.042mol磷酸缓冲液（220:100:10） 流速1.2ml/min。 取肝素抗凝血浆 0.5ml，加入内标10μl(20μg)、环己烷-异丙醇(9:1)5ml、4mol/LHCl0.2ml。旋涡混合后，离心10min，3000转/分。有机层置30℃下空气吹干。加流动相10ml溶解，进样20μl。 取一定量的布洛 芬及内标标准液，直接加入环己烷-异丙醇(9:1)4.5ml，与血样品在同一条件下吹干。 以1.0 ml流动相溶解进样。布洛芬浓度分别为0.5、10、40μg/ml，内标20μg/ml。 测得峰高比（Y）与布洛芬浓度（C）的回归方程为Y=0.0023+0.0384C，相关系数r=0.9999。本法最低检测血浓度为0.1μg/ml。 RP-HPLC法测定血中布洛芬含量 血浆样品制备 色谱条件 RP-HPLC法测定血中布洛芬含量 本章小结 TEXT 分类和理化性质 鉴别试验 体内药物分析 一水杨酸类 1典型药物 2理化性质 二苯甲酸类 1典型药物 2理化性质 三其他芳酸类 一与铁盐的反应 二重氮化-偶合反应 三氧化反应 四水解反应 五分解反应 六紫外吸收光谱 七红外吸收光谱 一阿司匹林中特殊杂质的检查 二对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查 三其他芳酸及其酯类的杂质检查 一、酸碱滴定法 1直接滴定法 2水解后剩余滴定法 3两步滴定法 二、双相液滴定法 三、UV法 1直接U