第1章 基因工程概述.ppt

* 基因工程 西南大学生物技术专业 * 基因工程在农业上的应用： ⑴. 蛋白类杀虫剂（生物农药）：抗广谱虫害植物； ⑵. 转基因植物：是农业生物技术的主要内容。将克隆到的特殊基因导入受体植物，使之增加一些优质性状（高产、稳定、优质、抗虫、抗病等）。如提高植物光合效率、豆科植物的固氮效率（使非固氮植物转变为固氮植物或能与根瘤菌共生固氮）。 ⑶. 转基因动物：将外源基因导入动物细胞，并在基因组内稳定整合，遗传给后代。 使动物成为生物反应器生产有用的活性蛋白等。如在乳汁中分泌人组织纤溶酶源激活物（TPA）和尿激酶的转基因小鼠； 分泌a1抗胰蛋白酶的转基因山羊等。 * 基因工程 西南大学生物技术专业 * 基因工程在医学上的应用： （1）基因工程药物：现有50多种，包括多肽、蛋白类和酶类。我国有10多种，如重组人干扰素α-1b、抗病毒因子、抗癌因子、新型抗生素、疫苗、抗衰老保健品、心脑血管药物、生长因子、诊断试剂。 （2）基因诊断：利用基因探针技术进行疾病诊断。 （3）基因治疗：将外源正常基因导入靶细胞，取代突变基因、补充缺失基因或关闭异常基因，达到从根本上治疗疾病的目的。 * 基因工程 西南大学生物技术专业 * 第三节 基因的结构——基因操作的理论基础 一、基因的结构组成对基因操作的影响 1、基因及其产物的共线性：一个基因的核苷酸序列与其产物的氨基酸序列一一对应。 N个氨基酸=3N个编码碱基。 2、基因及其产物的非共线性。间断基因。 内含子（intron）是指真核基因在RNA加工过程中从原初转录本中剪去而不进入成熟RNA结构、不具有氨基酸编码能力的一段序列。 外显子（exon）：是真核基因转录本中剪去内含子后所保留的RNA片段，它们拼接并进行适当修饰后成为成熟RNA并执行相应功能。 * 基因工程 西南大学生物技术专业 * 3、基因的重叠性与可变性： 基因的重叠性：单个DNA序列可编码一个以上的蛋白质，它们在结构上可以具有序列重复性，也可以是相互完全不同的全新蛋白质。 原因：可变性转录起始位点、可变性起始位密码子、可变性编码终止位点、可变性剪接。 开放读码框（open reading frame，ORF）：成熟mRNA中从起始密码子ATG至终止密码子（TAA、TAG或TGA之一）之间形成的一个连续的氨基酸编码区间。 以起始密码子的第1个碱基作为+1，其5’方向的第1个碱基为-1。 * 基因工程 西南大学生物技术专业 * 4、启动子和终止子 启动子（promoter）：基因转录过程中控制起始的部位，通常是位于转录起始位点5’上游的一段DNA区间，其上有许多顺式元件。 转录起始位点（transcription start site）：起始转录的第一个碱基，也是掺入到RNA中的第1个碱基。在转录研究中记为+1，其5’方向的第1个碱基（已属于启动子而非转录区）为-1。 侧翼序列（flanking sequence）：一条核酸单链上位于某一特定位置的5’或3’方向的序列。 上游（upstream）：一条核酸单链上位于某一碱基的5’方向。 下游（downstream）：一条核酸单链上位于某一碱基的3’方向。 * 基因工程 西南大学生物技术专业 * 终止子（terminator）：位于基因的3’部位、终止基因转录过程的一段DNA区间。有依赖不依赖ρ因子两种。 核糖体结合位点（ribosomal binding site, RBS）：位于mRNA起始密码子及其正上游的一段区间，是核糖体结合并起始翻译过程的位点。原核和真核的RBS显著不同。 转录单位（transcription unit）/转录本（transcript）：从转录起始位点直至转录的最后一个碱基之间被转录的RNA序列，可以包含一或多个蛋白编码框。 * 基因工程 西南大学生物技术专业 * 酶切 酶切 连接 转化 筛选 ...GAATTC... ...CTTAAG... ...G ...CTTAA AATTC... G... EcoRI 二、基因克隆的通用策略——基因分离 文库构建、探针制备、引物获得取、目标基因分离 * 基因工程 西南大学生物技术专业 * 传统的基因克隆（gene cloning） * 基因工程 西南大学生物技术专业 * 亚克隆（subcloning）： 1、将大片段克隆子的DNA重新打断成小片段，然后分别克隆到新的载体中，供进一步研究。 初步克隆中的外源片段往往较长，含有许多目的基因片段以外的DNA片段，在诸如表达序列分析和突变等操作中不便进行，因此必须将目的基因所对应的一小段DNA找出来，这个过程叫“亚克隆”。 2、通指将DNA片段从一个载体穿梭克隆到另一个载体的过程。 亚克隆技术：泛指实验室中以DNA在大肠