论文：紫草色素的提取及高效液相色谱法分析.doc

紫草色素的提取及高效液相色谱法分析 摘要:采用脂肪提取器法、微波提取法以及超声波提取法进行了紫草色素的提取实验，选用的提取溶剂为石油醚、乙酸乙醋以及95%乙醇，结果表明使用微波法采用95%乙醉为溶剂可以得到最多数量的提取物。此外，建立了提取物样品的高效液相色谱定量分析方法，分析结果表明采用脂肪提取器法，使用乙酸乙醋为提取溶剂时的提取效率最高。 关键词:紫草色素;提取;高效液相色谱 紫草为紫草科多年生草本植物，因根呈紫色而得名。因其含有多种生理活性成分，在医药、化妆品和印染工业中具有广泛用途〔‘1。紫草提取物主要成分是蔡醒类紫草色素，其中主要有乙酞紫草素、紫草素等。对紫草提取物的测定方法主要有比色法、重量法、紫外一可见分光光度法、薄层扫描法等，所有这些方法主要用于测定紫草提取物中的蔡醒类化合物总量或主要单体含量(2l。高效液相色谱法(HPLC)是现代分离分析的一个重要方法，近年来有关HPLC对天然产物的研究很多(3)。本研究中分别以乙醇、石油醚以及乙酸乙醋为溶剂，采用了脂肪提取器法、微波法以及超声波法对紫草进行了提取研究，所得到的紫草提取物采用HPLC对样品进行分离检测，根据各样品中峰面积大小来评估提取方法的优劣，为优化提取紫草色素的方法提供了依据。 1实验部分 1.2提取方法 1.2.1脂肪提取器法 称取三份质量均为lug的紫草分别放人3个平底烧瓶中，使用脂肪提取器提取4小时。旋干溶剂，放置在真空干燥箱中干燥24小时后称重。 1.2.2微波提取法 称取三份质量均为lug的紫草分别放人3个100m1锥形瓶中，各取90m1 95%的乙醇、乙酸乙酷、石油醚待用，安装好冷凝装置及干燥管，置于微波炉中提取30分钟;将提取物冷却后抽滤，旋干溶剂，放置在真空干燥箱中干燥24小时后称重。 1.2.3超声波提取法 称取三份质量均为lug的紫草分别放人3个1001111锥形瓶中，取体积均为90m1的95%乙醇、乙酸乙酷、石油醚倒人其中，放置在水浴式超声波清洗机中，锥形瓶14连有冷凝装置及干燥管，超声提取Jun-nn，旋干溶剂，放置在真空干燥箱中干燥24h后称重。 工3 f1PLC方法 本实验中使用的流动相为水一乙睛一四氢吠喃一磷酸，体积比为34:35: 29: 2,流速1. OmIJmin，柱温400C，进样量20 wL，样品经紫外可见分光光度计扫描，其最大吸收波长为515 nm，故在进行高效液相色谱分离实验中，设定检测器波长为515 nm，实验表明，在此色谱条件下，基线平稳，峰型对称，分离效果较好。515nm的确定是根据紫外可见分光光度计的扫描结果而定，此波长对应的恰好是提取物中有色物质的吸收，故可根据相应峰面积大小评估提取效果，而选取的五个峰是所有样品中均会出现的峰，这五个峰由其大小来看，应该是提取物中最主要的成分。 2结果与讨论 2.1提取溶剂对提取物质量的影响 在使用上述三种方法及三种溶剂对紫草中的有效成分进行提取后，得到了其各自的提取物质量，数据见表to1 实验数据表明，不管使用哪种方法，以95%乙醇为提取溶剂时所得提取物的堡都是最多，使用石油醚为提取溶剂时，所得提取物质址在三种提取方法中仅分别相当于使用95%乙醇为提取溶剂的54.2% ,41. 1%和49. 90I0，对于使用乙酸乙酷为提取溶剂时这一数据分别为93.8% ,57 . 8%出现这一结果的原因主要与乙醇对各种极性的化合物均具有较好的溶解性有关，而石油醚和乙酸乙酷因为极性较低，故紫草中的一些极性组分难以被提取出来，从而导致使用这两种溶剂时所得提取物较少。 2.2 HPLC法对紫草色素提取方法的评估 本实验采用HPLC法对上述应用不同方法和溶剂所得到的9个紫草提取物样品进行了HPLC分离测定，在选定的色潜条件下，经60分钟实验，所有峰在25分钟以内出完，典型的色谱图见图1所示，这是样品6的色谱图，图中所标识的5个峰(下文中称为】-5号峰)是本研究中所关注的5个主要组分，因为采用5巧mn检测，故可以用峰总面积数据来衡量提取物中紫草色素的总量。 将9个样品使用流动相配制成浓度均为1.475 mg/ml的9个样品溶液，进行色谱分离实验，我们所关注的5个主要成分对应的峰面积和总峰面积数据见表2从表1和表2的数据可见:相同浓度的9种样品溶液中，样品1中的所含紫草色素最少，即采用脂肪提取器法使用95%的乙醇为溶剂时，得到的提取物的数量尽管很多，但是提取物中的紫草色素成分却是最少的;采用脂肪提取器法，使用石油醚为溶剂时得到的样品2的数量虽然最少，但相同浓度下所含紫草色素的量最高;使用微波提取法时无论使用什么溶剂，所得到的总的紫草色素