中国水仙REMAP反应体系的建立和优化.PDF

安徽农业大学学报, 2013, 40(2): 290-293 Journal of Anhui Agricultural University 网络出版时间：2013-3-7 17:51:35 [URL] /kcms/detail/34.1162.S1751.010.html 中国水仙REMAP 反应体系的建立和优化 林晓红1, 2, 3 ，潘东明2, 3 (1. 漳州城市职业学院，漳州 363000 ；2. 福建农林大学园艺学院，福州 350002 ； 3. 福建农林大学园艺产品贮运保鲜研究所，福州 350002) 摘 要：对影响中国水仙“金盏”品种的 REMAP-PCR 扩增反应的各个参数进行优化，建立适合中国水仙的 REMAP 反应体系20 μL ，包括如下成分：模板DNA 40 ng 、dNTPs 0.2 mmol·L-1 、引物0.45 μmol·L-1 、Taq 酶1U 和 10 ×Buffer （含Mg2+ ）2 μL 。扩增程序为反应程序：94 ℃预变性4 min；94 ℃变性40 s ，55 ℃退火40 s；72 ℃延伸 90 s ，共35 个循环；最后72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。该反应体系标记点位清晰、稳定、重复性好，适宜中国水仙 的REMAP 分析，为应用REMAP 技术鉴定中国水仙种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了 基础。 关键词：中国水仙；金盏；REMAP；体系建立；优化 中图分类号：S682.21 文献标识码：A 文章编号：1672−352X (2013)02−0290−04 Establishment and optimization of REMAP system in Chinese narcissus LIN Xiao-hong1, 2, 3, PAN Dong-ming2, 3 (1. Zhangzhou City College, Zhangzhou 363000; 2. College of Horticulture, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002; 3. Institute of Storage Science and Technology of Horticultural Products, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002) Abstract: Factors affecting REMAP-PCR application of Chinese narcissu Jinzhan were optimized in this study , and REMAP system for Chinese narcissus was established. Each 20 µL amplification reaction consisted of 2＋ -1 -1 -1 DNA 40 ng, 10×Buffer including Mg 2 µL, REMAP primer (10 µmol·L ) 0.45 µmol·L , dNTP (10 mmol·L ) -1 -1 0.2 mmol·L , Ex Taq polymerase (5 U·µL )1 U. Amplication was under the following conditions: 4 min at 94 ℃ for 1cycle, followed by 40 s at 94℃, 40 s at 55℃, and 90 s at 72℃