选修三-1.1重组技术基本工具.ppt

基因工程概念 * 蓝色素基因 三色紫罗兰 玫瑰 导入 目的基因 受体细胞 专题1 基因工程 §1.1DNA重组技术的基本工具 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术或基因拼接技术。 问题探讨： 　　　苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　　让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 想一想需要做哪些关键工作？ 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 普通棉花　　抗虫棉 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 在以上过程中关键步骤或难点是什么？ 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 通过运载体导入 转基因棉花含抗虫基因 转基因棉花有抗虫特性 基因工程培育抗虫棉的主要步骤： 步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 步骤二： 抗虫基因与运载体DNA“缝合” 步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 解决培育抗虫棉的步骤需要哪些工具？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 步骤二： 抗虫基因与运载体DNA“缝合” 步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—基因进入受体细胞的载体 一、DNA重组技术的基本工具 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” ⒈主要来源： ⒉种类与命名： ⒊作用特点： ⒋作用结果： 阅读P4-5页，限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1.主要来源： ⒉种类与命名： ⒊作用特点： 4.限制酶识别序列 5.作用结果： 识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要从原核生物中分离纯化 产生黏性末端或平末端 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成 ⒉种类与命名： 现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。 EcoRⅠ SmaⅠ 粘质沙雷氏杆菌 （Serratia marcesens） 大肠杆菌 （Escherichia coli R） Go back 练习：流感嗜血杆菌的d菌株( Haemophilus influenzae d )中先后分离到3种限制酶，则分别命名为: HindⅠ、HindⅡ和HindⅢ T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A （一）限制性核酸内切酶 分子手术刀 A T G G C A T C T T C G A A 磷酸二酯键： 即脱氧核糖、磷酸之间的连接 （一）限制性核酸内切酶 分子手术刀 　 EcoRI限制酶的切割 　 黏性末端　　　　 黏性末端 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaI限制酶的切割 平末端　　　平末端 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。 想一想限制酶所识别的序列有什么特点？ 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合 将不同种来源的DNA片段连接起来 生物A基因片段 生物B基因片段 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 酶切 区别 DNA解旋酶 限制酶 限制性内切酶与DNA解旋酶的区别 切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键 将DNA两条链的氢键打开形成两条单链 区别 DNA水解酶 限制酶 限制性内切酶与DNA水解酶的区别 切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键，形成片段的DNA. 切割磷酸二酯键，形成单个的脱氧核苷酸。 二、“