孔雀石绿测定-中山大学公共卫生学院.ppt

（1）全扫描模式，找出孔雀石绿的分子离子m/z，即一级质谱的母离子。 孔雀石绿的测定 * Segment Name Start mass End mass Scan Time Fragmentor Polarity MG 100 Positive 孔雀石绿的测定 （2）子离子扫描模式，找出孔雀石绿的特征碎片离子；灵敏度最高的碎片离子可以作为MRM模式的定量离子，次级灵敏的碎片离子可以作为辅助定性离子 * Compound Precursor Ion MS2 from MS2 to Scan Time Fragmentor Collision Energy Polarity MG 100 40 Positive 孔雀石绿的测定 （3）利用前面扫描模式找到的母离子和子离子，用MRM扫描模式做标准样品，记录积分峰面积作标准曲线图，计算2个样品中孔雀石绿的含量。 Compound Precursor Ion Product Ion Dwell Fragmentor Collision Energy MG 100 100 40 MG 100 100 40 MRM模式 标准曲线浓度(μg/L) 1 5 10 20 50 积分面积 * 实验报告 简述几种常用扫描模式的基本原理； 记录孔雀石绿的母离子、特征子离子及其对应扫描模式参数的设定； 用MRM模式，定量样品中孔雀石绿的含量 * 思考题 液质联用仪器的应用 * 5月21日周一中午把作业交到公卫学院919，谢 谢 * * by Li Ping * * by Li Ping * * by Li Ping * 液相质谱联用仪(LC-MS/MS)的应用——以孔雀石绿的检测为例 中山大学公共卫生学院 曾晓雯 2012.5 * 孔雀石绿（C23H25ClN2）是一种染料类杀菌剂，渔民用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等，而且为了使鳞受损的鱼延长生命，在运输过程中和存放池内，也常使用孔雀石绿。 * 孔雀石绿有高残留性和致癌、致畸、 致突变等作用； 2002年5月中国农业部已将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》； 2005年8月，福建、江西及安徽等地出口的鳗鱼产品，被验出含有孔雀石绿，国家质检总局首次下令全面回收。数日后香港更发现多种淡水鱼含有孔雀石绿，中国因此禁止所有淡水鱼出口到香港。同年9月1日香港在来自台湾的青斑海鱼样本中验出孔雀石绿； 国标规定（ GB/T19857-2005 ）：1μg/kg * 实验目的 1. 了解高效液相色谱-串联质谱的基本结构； 2. 熟悉LC-MS/MS常用几种检测模式，会（1）应用全扫描模式找孔雀石绿的分子离子峰，（2）应用子离子扫描模式找孔雀石绿的二级特征碎片离子，并（3）应用多重反应监测（MRM）测定样品孔雀石绿的含量。 * 质谱分析仪(MS) 需要高真空条件 质量分析系统 最好使用挥发性缓冲液 * 液相(HPLC) 高效分离混合物 出口压力为大气压 可以使用缓冲盐溶液 液相(HPLC)到质谱(MS)的接口 HPLC MS Interface (Key to Success!) 真空系统 检测器 质量分析器 离子源 * * 库仑爆炸 （Coulomb Explosions） Rayleigh Limit Reached + + + + + + + + + + - - - - - + + + + + + + + + + - - - - - + + + + + + - - + + + + + + - - 溶剂蒸发 + + 带电液滴 分析物离子 溶剂离子束 离子源：电喷雾(ESI)的电离过程 * Neutral Molecules Analyte Ions Clusters Salts 毛细管 液相的入口 雾化器 加热 N2 雾化气入口 锥孔 八极杆 四极杆 高能打拿极/电子倍增器 + + + + + 透镜 + + + + + + + + + + + + + 液质联用的电喷雾(ESI)接口 ESI电离原理 正离子模式 负离子模式 * 质量分析器 质量分析器：是质谱仪中将离子按质荷比分开的部分,离子通过分析器后,按不同质荷比(M/Z)分开,将相同的M/Z离子聚焦在一起,组成质谱。 * 四级杆：在两个相对的极杆之间加电压(U+Vcos?t)，在另两个相对的极杆上加-(U+Vcos?t)。离子进入可变电场后，只有具合适的曲率半径的离子可以通过中心小孔到达检测器。 + + + + * 实验室现有的质量分析器类型 串联四极质谱仪(MS/MS)：三重四极（QqQ） 离子源→第一分析器→碰撞室→第二分析器→接收器 MS1 CID MS2