第七章外源基因表达系统42张幻灯片1.pptVIP

基因工程所用的宿主菌,都是经过人工改造的. 原因是 野生型细菌具有针对外源DNA的限制和修饰系统,会切割未经修饰的外源DNA. 经过改造的宿主菌一般具备下列特点 限制系统缺陷型:不切割外源DNA. 重组缺陷型 :避免外源DNA与宿主DNA的重组. 转化亲和型:改变细胞壁的通透性,提高转化效率. 二.大肠杆菌的表达条件 克隆的真核基因必须连续，无内含子序列。 大肠杆菌不能识别真核启动子，外源基因须置于原核启动子的控制之下。常用的启动子有 Lac 、trp、tac、T7、λPL等。 强启动子 外源蛋白质的表达占菌体总蛋 白质的10-30％。 启动子有关知识 大肠杆菌的启动子是控制外源基因转录的重要元件，基因表达程度与启动子的强弱密切相关。 启动子的强弱取决于 　　①启动子本身的序列，尤其是－10区和－35区两个六聚体盒的碱基组成以及彼此的间隔长度； 　　②启动子与外源基因转录起始位点之间的距离； 常用的大肠杆菌启动子 Plac 　来源于乳糖操纵子 Ptrp　　来源于色氨酸操纵子 PL　　　来源于λ噬菌体早期操纵子 PrecA　　来源于recA基因 启动子的可控性 目前应用的大肠杆菌启动子，一般含有与阻遏蛋白特异性结合的操纵子序列，因此由这些启动子介导的外源基因在大肠杆菌细胞内通常是痕量表达的。例如在不含乳糖的培养基内， P