ATP-生物荧光法在消化系恶性实体肿瘤体外药物敏感性的应用_0.docVIP

ATP-生物荧光法在消化系恶性实体肿瘤体外药物敏感性的应用 作者：苏承武，唐永梅，蔡 捷，唐东平 【摘要】 目的 探讨ATP-生物荧光法（ATP-TCA系统）在消化道恶性实体肿瘤体外药物敏感性试验中的 应用 。 方法 取肝癌、胃癌、直肠癌、结肠癌共39例患者的手术标本，应用ATP-TCA系统方法做药物敏感性试验。结果 ATP-TCA的可评估率为92.31%；6种试验用化疗药物的敏感率分别为：丝裂霉素12.50%，紫杉醇23.33%，顺铂30.77%，羟喜树碱42.31%，5-氟尿嘧啶51.85%，表阿霉素61.54%。结论 ATP-生物荧光法可用于消化道恶性实体肿瘤化疗药物的筛选。 【关键词】 ATP-生物荧光法；恶性实体肿瘤；化疗 【Abstract】 Objective To study the application of the ex vivo ATP-bioluminescence assay(ATP-TCA) in the chemotherapy of digestive tract malignant solid tumor.Methods The surgical specimens of 39 patients，including primary liver cancer，gastric carcinoma，colic and rectal carcinoma，were tested by the ATP-TCA.Results Evaluable test results were achieved in 36 of 39 patients，the evaluability rate was 92.31%.The sensitive rates of mitomycin C (MMC)，paclitaxel (TXL)，cisplatin (CDDP)，camptothece (HCT)，5-fluoruracil (5-FU)，epirubicin (EPI)，was 12.50%，23.33%，30.77%，42.31%，51.85%，61.54%，respectively.Conclusion ATP-TCA is a good option in the chemotherapeufic agents screening of digestive duct malignant solid tumor. 【Key words】 ATP-bioluminescence assay；malignant solid tumor；chemotherapy 化学药物 治疗 是消化道恶性实体肿瘤治疗的重要手段之一，体外化疗药物敏感性试验是实现个体化治疗，提高临床治疗效率的重要方法，在本 研究 中，我们以对消化道恶性实体肿瘤有较高评估率的三磷酸腺苷生物荧光法（ATP-TCA），应用于39例消化道恶性实体肿瘤化疗药物的筛选，以期为临床化疗提供 参考 依据。三磷酸腺苷（ATP）是活细胞的基本能量单位，当细胞的代谢受损时，ATP合成下降，细胞死亡时受酶的作用，ATP迅速水解消失，ATP水平与活细胞数量呈正相关，因此测定细胞内源性ATP含量，可反映细胞活性和活细胞的数量。ATP体外药敏试验的原理是细胞内ATP与荧光素—荧光素酶复合物作用产生可测荧光，检测荧光值 计算 出化疗药物对肿瘤细胞的抑制作用［1，2］。 1 资料与方法 1.1 一般资料 收集2003年3月～2004年12月在我院住院的患者39例，男36例，女3例，肝细胞癌22例，胃癌8例，直肠癌5例，结肠癌4例，均为手术标本。 1.2 材料 ATP-TCA诊断试剂盒（包括改良PRMI 1640培养基）由北京金紫晶生物技术有限公司提供。MPL-1型自发光 分析 仪为德国Berthold公司产品。化学药物包括丝裂霉素（MMC，日本协和发酵 工业 株式会社）、紫杉醇（TXL，澳大利亚FH科贸有限公司）、羟喜树碱（HCT，广西东兰制药厂）、顺铂（CDDP，深圳市生物谷医药有限公司）、5-氟尿嘧啶（5-FU，南通制药总厂）、表阿霉素（EPI，浙江海政制药）。 1.3 方法 ATP-TCA操作步骤（按诊断试剂盒使用说明操作）：取肿瘤组织标本，在无菌条件下，剥离肿瘤组织的纤维、脂肪及结缔组织，然后用剪刀将肿瘤组织尽可能剪成小碎块，过200目钢网后放入肿瘤组织解离酶液中，置37、5%CO2、95%湿度下孵育1.5~3h。在4、1500r/min条件下，离心20min，弃上清液，重复两次，制成细胞悬液，取35μl用台盼蓝染色，倒置显微镜下计数，并观察细胞活性。调整细胞至20～40万个/ml浓度，以每孔0.1ml接种至96孔培养板内