前列腺癌p21 mRNA的表达及其与淋巴结转移的相关性.docVIP

前列腺癌p21 mRNA的表达及其与淋巴结转移的相关性 【摘要】 目的 研究原发前列腺癌中p21的表达情况，探讨其在前列腺癌中的临床意义。方法 用RTPCR的方法检测前列腺癌及癌旁组织p21的表达。结果 在67例前列腺癌组织中，有31例(46.29%)表达p21 mRNA;癌旁正常组织中，有49例(73.13%)表达p21mRNA。将前列腺癌组织分成2组，分别是有淋巴结转移和无淋巴结转移组。在41例有区域淋巴结转移病例中，p21 mRNA表达13例(31.71%)。在26例无淋巴结转移的病例中，p21 mRNA表达18例(69.23%)。 结论 p21在原发前列腺癌组织中的表达与癌旁正常组织相比明显减少;P21在有淋巴结转移组织表达明显低于无淋巴结转移组。 【关键词】 p21;前列腺癌;抑癌基因 p21是目前已知的具有最广泛CDK抑制活性的细胞周期抑制蛋白，负性调节CDK的功能预示其在抑制肿瘤方面的作用。P21与肿瘤发生、 发展 及其生物学行为有关，有可能成为估计肿瘤恶性行为及预后的新指标。本实验旨在应用分子生物学的方法检测和分析原发前列腺癌中p21的表达情况，探讨其在前列腺癌中的临床意义。 　 　1 材料与方法 　　1.1 组织与试剂 收集2007年1月至2008年7月本院泌尿外科67例前列腺癌手术患者的癌组织和癌旁正常组织。手术切除后立即送至-80深低温冰箱中冻存。所有病例术前均未发现远处转移，未行放疗和化疗，术后均有病理证实，均为原发前列腺癌。Trizol购于Invitron公司，Taq酶购于Takara公司，RT试剂盒购于MBI公司。 　　1.2 方法 通过RTPCR检测p21 mRNA的表达 　　1.2.1 总RNA提取 从-80冰箱取出保存好的组织，称量50 mg，在液氮中研磨成粉末，用 Trizol一步法裂解细胞提取总RNA，用紫外分光光度计测量 260 nm/280 nm吸光度比值在1.8～2.0之间，RNA变性凝胶电泳检测。 　　1.2.2 序列引物 上游： 5′TACTCCCCTGCCCTCAACAA 3′，下游： 5′CGCTATCTGAGCAGCGCTCAT 3′，由上海生工合成。 　　1.2.3 反转录 以提取的RNA为模板，条件为： oligo(dT)18 ( 0.5 g/L ) 1 μl，总 RNA 1 μg，去离子水6 μl，70 5 min，立即冰浴 ，随后依次加入5×reaction buffer 4 μl，RNA酶抑制剂 (20 × 10 U/L) 1 μl，dNTP (10 mmol /L)2 μl，依次 37 5 min，42 60 min，70 10 min。PCR ： 94 2 min，随后加入Taq DNA聚合酶 0.25 μl; 94 30 s，55 30 s，72 1 min，30个循环，最后延伸72 1 min。 　　1.4 统计学处理 采用χ2检验。 　 　2 结 果 　　2.1 RTPCR结果 总RNA电泳显示 28S、18S条带清晰，5S稍暗，260 nm /280 nm吸光度比值为1.89。PCR产物1.2 g/L琼脂糖凝胶电泳结果显示，扩增出预期大小的目的片段，大小约 483 bp(图1)。 　　1：癌旁组织，2：癌组织，M：100～1 400 bp Marker，No：有淋巴结转移癌组织，N1：无淋巴结转移癌组织 　　图1 RTPCR扩增结果 　　2.2 p21 mRNA在原发前列腺癌的表达 在67例癌组织中，有31例(46.29%)表达p21 mRNA。癌旁正常组织中，有49例(73.13%)表达p21 mRNA。组间比较有非常显著性的差异(χ2=10.05，P0.01)。 　　2.3 p21mRNA的表达与淋巴结转移 在41例有区域淋巴结转移病例中，p21mRNA表达13例(31.71%);在26例无淋巴结转移的病例中，p21mRNA表达18例(69.23%)，组间比较有显著性差异(χ2=8.02，P0.01)。 　 　3 讨 论 　　许多研究表明，P21 与肿瘤的分化、增生、转移有关，并且具有预后价值〔1～3〕。本实验中，p21在癌旁正常组织中的表达率为73.13%，在癌组织中表达只有46.29%，在无淋巴结转移的病例中表达率高达69.23%，而在淋巴结转移的病例中迅速降低为31.71%，可能有以下几个原因：(1) p21基因突变与缺失。正常组织在受到外界因素的影响和刺激时，有可能出现p21的突变和缺失〔4〕。(2)本实验选取的正常组织均为食管癌患者肿瘤组织旁的正常组织，不除外有组织恶变倾向，p21突变缺失的可能。笔者认为p21 mRNA在有无淋巴结转移的病例中差异显著有可能是：在无淋巴结转移原发癌中，作为抑癌基因p21代偿性过度表