复方大果木姜子软胶囊抗流感病毒作用的体外实验研究_12.docVIP

复方大果木姜子软胶囊抗流感病毒作用的体外实验研究 作者：胡万福，张永萍，邱德文 【关键词】 复方大果木姜子软胶囊；,,FM1；,,MDCK；,,抑制病毒增殖；,,抗病毒活性 　　摘要：目的对复方大果木姜子软胶囊进行体外抗流感病毒实验 研究 ，开发安全有效的抗流感病毒的中药新药。 方法 细胞培养实验方法。结果复方大果木姜子软胶囊在MDCK细胞中的半数中毒浓度（TC50）为1.248 mgml-1；预防组抗流感病毒的半数有效浓度（EC50）为0.117 mgml-1； 治疗 指数（TI）为10.67；感染病毒0~7 h后均有明显的抑制FM1在MDCK细胞中增殖的作用。结论复方大果木姜子软胶囊对流感病毒FM1在MDCK细胞中的增殖具有明显的抑制作用。 　　关键词：复方大果木姜子软胶囊； FM1； MDCK； 抑制病毒增殖； 抗病毒活性 　　Anti-influenza Effect of Fufang Daguomujizngzi Ruanjiaonang in vitro 　　Abstract：ObjectiveTo observe the effect of anti-virus by compound-herbs china momum migao H.W.Li soft capsule,to develop an effective new drug of anti-virus.Methods The cell culture experiment.ResultsIt was found to be a potential inhibitor of influenza FM1 virus in a concentration-dependent manner with a TC50of 1.248 mgml-1 in MDCK culture. The EC50 was 0.117 mgml-1(TI=10.67) when drug was added for 0~7 hours after virus infection. ConclusionThere might be a quantity-effect relationship and it has notable restrain effect. 　　Key words：China momum migao H.W.Li soft capsule; FM1; Restrain clone of virus; Anti-virus activity 　　流感病毒易引发急性呼吸道疾病，不仅 影响 人们的正常生活，还容易引发严重的并发症。由于其表面抗原能经常不断发生变异，使本来有效的流感病毒疫苗很快失效［1］。当前用于防治流感的药物主要以化学合成药物为主，如金刚烷胺（Amantadine）、金刚乙胺（Rimanta-dine）和扎那米韦（Zanamivir）等，分别存在有毒副作用和服用不方便的 问题 ［2~4］，因此，研制开发抗流感病毒的低毒有效的中药制剂势在必行。现有的研究表明，大果木姜子具有增加血液循环、改善心肌缺血［5~7］、抗流感病毒［8］等作用。复方大果木姜软胶囊是以大果木姜子为主要原料，经提取各味药材的有效部位制成的软胶囊剂。本研究采用细胞培养技术对复方大果木姜子软胶囊中药物有效部位抗流感病毒FM1活性进行了研究。现将实验结果报道如下。 　　1 材料及方法 　　1.1 药品及试剂复方大果木姜子软胶囊（自制，批；MEM培养液（购于GIBCO公司，批号1284573）；胰酶（购于GIBCO公司，批号BE2189）；新生牛血清（购于杭州四季青生物制剂公司，批号040624）；流感病毒亚甲型FM1（H1N1）、MDCK细胞（均由贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心提供）。 　　1.2 细胞培养 　　1.2.1 病毒血凝滴度测定按常规操作将病毒接种于9~11 d胚龄鸡胚的尿囊液，测定红细胞凝集活性，得病毒血凝滴度≥640，细菌培养阴性，分装，置-85℃保存待用。 　　1.2.2 MDCK细胞培养MDCK细胞采用单层接种培养，培养液为含10%新生牛血清的MEM培养液（含1×105 uL-1青霉素，100 mgL-1链霉素，0.2% heps,0.2% NaHCO3），37，5% CO2培养箱中培养。 　　1.3 病毒在MDCK细胞中毒力测定用含2%新生牛血清的MEM将病毒稀释成10，102，103，104，104，105，106，107，108，109，1010倍10个浓度，按常量分别加入已长成单层细胞的96孔细胞板中，置于37、5%CO2温箱内孵育2 h，弃去含病毒维持液，更换正常细胞培养液，继续培养，分别于1，2，3，4，5，6，7 d