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分子生物学检验技术质 粒PLASMID DNA克隆中最重要的工具 目录 1. 质粒的一般概念 2. 如何命名质粒(质粒命名的标准法) 3. 质粒的共性 4. 基于质粒性质的分类 A. Replication Forms B. 接合转移 a. 接合转移的介绍: Tra OriT b.分类 C. 质粒的大小 D. 质粒的宿主范围 E. 质粒的功能 a. F 质粒( F 因子) b. R质粒( 抗性质粒，F－ 因子） c. Col 质粒: F. 质粒的不相容性: a. 不相容性 (inc) 的介绍 b. 分类 1.质粒的一般概念 质粒是一类小的共价闭环双链DNA分子，为存在于细菌细胞内、染色体外的遗传因子。 ( 注意: 某些特殊的质粒可能为 RNA、 线状、或者单链的 ) 2. 如何命名质粒 质粒命名的标准法 : 举例 pIJ702 - p: 代表 plasmid的第一个字母 - IJ(2-4 个大写字母): 代表一个人名 (或者一个地方,如你们的名字，或者你们的大学名称） - 702(一个或者多个数字): 表示一个实验的人为编号。 课堂提问: 你构建了911号质粒，请用你的拼音名字对该质粒进行命名? 3.质粒的共性: A. 自我复制的DNA分子[ori site (ori V)] [一个质粒是一个复制子 ] NOTE: Ori=Origin V=Vegetable B. 当细胞生长分裂时，可进行复制 C. 分散到子代细胞中[par 位点] D. 存在于所有类型的细胞中 E. 通常不编码必需的基因产物 F. 编码 “辅助性”功能 G. 大小范围： ~2 kb-350kp H. 绝大多数为环状，极少数为线状 I. 各种质粒的拷贝数不尽相同; 范围为1到100拷贝数以上。 J. 质粒的密度大于细菌染色体的, 但小于所有RNA的。（该特性在氯化铯密度梯度离心中用于在细胞裂解液中将质粒与RNA和染色体分离开来）。 K. 质粒是超螺旋分子，在pH3-12 的溶液中可保持稳定。（在质粒DNA的碱裂解微量制备法中，该特性用于将质粒DNA与染色体DNA分开。） 4. 质粒分类: (基于质粒性质) A. 复制类型: B. 接合转移: a. 接合转移的介绍: Tra 操纵子 OriT 位点 Transfer 转移 b. 分类 基于接合转移的特性可将质粒分成4类: 接合型 Conjugative – 能启动与受体菌的接触。 移动型 Mobilizable – 能将其DNA用于转移 自身传递型 Self transmissible – 即能接合，又能转移的质粒 非传递型 – 即不能启动与受体细胞的接触，又不能转移到某些受体细胞中的质粒 C. 质粒大小: 小质粒: 1.5-15kb 非接合型质粒 大质粒: 60-300kb 自我传递型质粒 D. 质粒的宿主范围: 由其复制起始位点决定窄宿主范围质粒: 只能在亲缘关系相近的种属中复制。宽宿主范围质粒: 能在各种不同的宿主细胞中复制。 E. 质粒功能: a. F 质粒: 曾广泛用于细菌遗传学研究。 也被称为 F 因子。 Ori V Ori T Tra 操纵子 IS[insertion segment 插入片段] b.R 质粒(抗性质粒): 一类自身传递性质粒，其携有数个不同的抗生素抗性的基因。 它们在医学上很重要，也称为R-因子。 1940早期： 开始使用青霉素1946 - 14% 的葡萄球菌具有青霉素抗性 1947 - 38% PenR1969 - 59% PenR1970‘s – 几乎100％的葡萄球菌都是 PenR c. Col 质粒: 产生大肠杆菌毒素( 一种细菌毒素，可影响敏感细胞，并抑制其生长） 即可是，也可不是自身传递性质粒 ColE1 质粒可移动，而不是接合型的； 绝大多数载体含有Col E1 oriV 位点。 F. 质粒的不相容性: a. 不相容性（ incompatib