基因工程基因工程的主要技术与原理-核酸分离电泳.pptVIP

生物技术专业核心课程 细菌的培养 细菌的收集和裂解 质粒DNA的分离和纯化 优点： （1）便于分离； （2）便于检测； （3）便于回收。 一、核酸凝胶电泳的基本原理 核酸分子骨架中的磷酸基团，呈负离子化状态； 核酸分子在一定的电场强度的电场中，它们会向正 电极方向迁移； 一、琼脂糖凝胶电泳Agarose gel electrophoresis （二）DNA的迁移速率决定因素 双链DNA分子迁移的速率 与其碱基对数的常用对数 近似成反比； 不同类型琼脂糖的性质 不同类型琼脂糖分离DNA片段的范围 5.所用的电压 低电压时DNA片段迁移率与所用的电压成正比； TAE、TPE及TBE电泳缓冲液比较 （三） 凝胶载样缓冲液 6×凝胶载样缓冲液 （四）琼脂糖凝胶中DNA的检测 1.凝胶的EB染色 使用EB染色注意事项 （1）EB被认为是一种强致癌物质 2 凝胶SYBR Gold的染色 SYBR Gold是一种新型极敏感染料的商品名称。 其与DNA结合的亲和力高，并且结合后，能够极 大增强荧光信号。 （五） 凝胶中DNA的成像 （六） 凝胶中DNA的回收 二、 聚丙烯酰胺凝胶电泳polyacrylamide gel electrophoresisPAGE 在四甲基乙二胺(TEMED)催化过硫酸铵还原产生的 自由基的存在下，丙烯酰胺单体的乙烯基聚合形成聚 丙烯酰胺