基因工程-21核酸的提取与纯化.pptVIP

第一章第一节 DNA的提取与纯化 Extraction and Purification of DNA 很多时候，基因工程学家有必要准备至少3种不同种类的DNA。 首先-全细胞DNA： 作为提取所需克隆基因的材料来源，是必须得到的。 全细胞DNA可以从细菌培养物、植物、动物细胞或其他任何用作研究的生物中获取。 第二种-纯净的质粒DNA： 从细菌中制备质粒DNA与纯化细胞总DNA遵循基本相同的步骤，只是在某个阶段有着一些明显的差别。 在这个阶段内，质粒DNA必须从细胞中的主要染色体DNA中分离出来，同时主要染色体DNA仍然要保留在细胞中。 最后，如果用噬菌体克隆载体，需要制备噬菌体DNA。 噬菌体DNA一般都是从噬菌体颗粒中制得，不从被侵染细胞中制得，因此不存在被细菌DNA污染的问题。 但在除去噬菌体衣壳过程中需要用到专门技术。 一个例外：M13噬菌体的双链复制模式， 像细菌质粒一样，M13噬菌体DNA也能够从被侵染的大肠杆菌中获得。 1 全细胞DNA的制备 制备细菌细胞的全部DNA时，用的是最简单的DNA纯化步骤。 步骤分为4个阶段： (1)培养细胞的生长和收集。 (2)细胞被破碎并释放出内含物。 (3)细胞抽提物被除去DNA外的所有成分。 (4)得到的DNA溶液被浓缩。 1.1 细菌培养物的生长和收集 让绝大多数细菌在液体培养基[肉汤培养基]中生长起来