第4章酶化学要点.pptVIP

* 第五节 影响酶促反应速度的因素 （酶促反应动力学）  2、底物浓度 3、pH （最适 pH的概念） 4、 温度 （最适温度的概念） 5、激活剂 6、抑制剂 1、酶浓度 当S足够过量，其它条件固定且无不利因素时，v=k[E] 一 酶浓度对反应速度的影响 当反应系统中底物的浓度足够大时，酶促反应速度与酶浓度成正比，即ν=k[E]。 二 底物浓度对酶反应速度的影响 1、酶反应速度与底物浓度的关系曲线 （Michaelis—Menten曲线） 2、米氏方程的提出及推导 3、米氏常数的意义 4、米氏常数的测定 酶反应速度与底物浓度的关系曲线 底物浓度与酶促反应速度的关系 在低底物浓度时, 反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应特征。 当底物浓度达到一定值，几乎所有的酶都与底物结合后，反应速度达到最大值（Vmax），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。 中间为混合级反应 （二）米氏方程式 1913年，德国化学家Michaelis和Menten根据中间产物学说对酶促反映的动力学进行研究，推导出了表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称为米氏方程。 Km — 米氏常数 Vmax — 最大反应速度 米氏方程的推导 令： 将（4）代入（3），则： [ES]生成速度： ，[ES]分解速度： 即： 则： (1) 经整理得： 由于酶促反应速度由[ES]决定，即 ，所以 (2) 将（2）代入（1）得： (3) 当酶反应体系处于恒态时： 当[Et]=[ES]时， (4) 所以 酶反应速度与底物浓度的关系曲线 米氏常数的意义 (1)当v=Vmax/2时，Km=[S]（ Km的单位为浓度单位） Km等于酶促反应速度达最大值一半时的底物浓度。 (2)是酶在一定条件下的特征物理常数，通过测定Km的数值，可鉴别酶。 在一定条件下，某种酶的Km值是恒定的，因而可以通过测定不同酶（特别是一组同工酶）的Km值，来判断是否为不同的酶。 (3)可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，E对S的亲合力愈大，Km愈大，E对S的亲合力愈小。 (4)可用于判断反应级数：当[S]0.01Km时，反应为一级反应；当[S]100Km时，ν=Vmax，反应为零级反应. 米氏常数的测定 基本原则： 将米氏方程变化成相当于y=ax+b的直线方程，再用作图法求出Km。 例：双倒数作图法（Lineweaver-Burk法） 米氏方程的双倒数形式： 1 Km 1 1 — = —— . — + —— v Vmax [S] Vmax 酶动力学的双倒数图线 三、溶液pH对反应速度的影响 观察pH对酶促反应速度的影响，通常为一“钟形”曲线，即pH过高或过低均可导致酶催化活性的下降。 酶催化活性最高时溶液的pH值就称为酶的最适pH。 人体内大多数酶的最适pH在6.5～8.0之间。 三 pH对酶反应速度的影响 ? 过酸过碱导致酶蛋白变性 ? 影响底物分子解离状态 ? 影响酶分子解离状态 ? 影响酶的活性中心构象 pH 最适 pH v 最适pH不是酶的特征常数，受外界的影响， 如底物的种类和浓度，缓冲液的性质和浓度， 也与温度和反应时间有关 四、温度对反应速度的影响 一般来说，酶促反应速度随温度的增高而加快。但当温度增加达到某一点后，由于酶蛋白的热变性作用，反应速度迅速下降，直到完全失活。 低温时由于活化分子数目减少，反应速度降低，但温度升高后，酶活性又可恢复。 酶促反应速度随温度升高而达到一最大值时的温度就称为酶的最适温度。 四 温度与酶反应速度的关系 ? 在达到最适温度以前，反应速度随温度升高而加快 ? 酶是蛋白质，其变性速度亦随温度上升而加快 ? 酶的最适温度不是一个固定不变的常数 v 温度 酶的最适温度不是特征常数，它与底物的种类、 介质pH、离子强度等有关 五 激活剂对酶作用的影响 类别 金属离子：K+、Na+、 Mg2+、Cu2+、Mn2+、Zn2+、Se3+ 、 Co2+、Fe2+ 阴离子： Cl-、Br- 有机分子 还原剂：抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽 金属螯合剂：EDTA 凡是能提高酶活性的物质，称为酶的激活剂（activator） 六 抑制剂对酶作用的影响